里氏木霉中木聚糖酶基因的克隆

摘要：本实验经3-5二硝基水杨酸法（DNS法）确定里氏木霉中木聚糖酶最佳诱导时间为72小时，利用里氏木霉的菌丝球进行总RNA的提取，通过RT-PCR法先反转录合成cDNA的一条链，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。将RT-PCR的产物与puC-T Simple连接后导入大肠杆菌DH5 感受态中进行蓝白斑筛选。挑选白色菌落在含有Amp的LB培养基中进行过夜培养，转化成功的菌株提取质粒后通过双酶切反应进行验证。94621

毕业论文关键词：里氏木霉，木聚糖酶，半纤维素，基因克隆

Abstract: In my study, 3-5, two nitro salicylic acid (DNS) method was used to determine xylanase, the optimum induction time was 72 hours,general RNA was isolated by the mycelium of Trichoderma reesei,a strand of cDNA was synthesized by reverse transcription by RT-PCR, and then amplified by DNA as a template through PCR。After the product of RT-PCR was connected with puC-T Simple, the blue pigment spots were screened into E。coli DH5 。The white colonies were selected for overnight culture in LB containing Amp medium, and the transformed strains were extracted and tested by double enzyme digestion。

Keywords：Trichoderma reesei，xylanase，hemicellose，gene cloning

1前言 4

1。1半纤维素的简介 4

1。2木聚糖的简介 4

1。3木聚糖酶的简介 4

1。4木聚糖酶的应用 4

1。5研究的目的及意义 5

2材料与方法 6

2。1材料 6

2。1。1菌种和载体 6

2。1。2主要仪器及设备 6

2。1。3酶和主要试剂 7

2。2试验方法 7

2。2。1主要试剂以及培养基的配制 7

2。2。2里氏木霉的培养 7

2。2。2。1里氏木霉的活化培养 7

2。2。2。2里氏木霉中木聚糖酶提取最佳时间的确定 8

2。2。2。3 DNS法测定木聚糖酶 8

2。2。3里氏木霉总RNA的提取 8

2。2。4。1引物设计 9

2。2。4。2 RNA的RT-PCR 9

2。2。4。3连接反应与大肠杆菌的转化 10

3结果与分析 11

3。1木糖标准曲线的绘制 11

3。2里氏木霉中木聚糖酶提取最佳时间的确定 12

3。3 RT-PCR扩增结果 12

3。5 重组质粒的电泳检测结果 13

3。6双酶切验证结果 14

结论 15

参考文献 16

致谢 18

1前言

半纤维素（hemicellulose）一直是国内外研究的热点，对解决全球资源匮乏、环境污染、粮食紧缺也有重要意义。木聚糖（xylan）是半纤维素的主要成分，结构复杂，所以木聚糖的降解需要一个复杂的酶系统，因此研究木聚糖酶具有广阔的前景。里氏木霉中木聚糖酶基因的克隆:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_202691.html