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徐紫薯系列甘薯花青素积累特性分析(3)

时间:2021-07-05 19:34来源:毕业论文
(3)下刀进行切片时要在材料的切面上滴上去离子水,,涂抹均匀,保证实验持材料湿润,然后使刀片与材料切口基本上保持平行,再用右手的臂力(不要用

(3)下刀进行切片时要在材料的切面上滴上去离子水,,涂抹均匀,保证实验持材料湿润,然后使刀片与材料切口基本上保持平行,再用右手的臂力(不要用手的腕力)向自身方向拉切。

(4)连续地切下数片后,将刀片放在培养皿的水中稍一晃动,将粘在刀片上的材料薄片抖进去离子水中,材料薄片随即漂浮在水面上。

(5)当所切除的材料薄片达到一定数量后,便可以在培养皿内挑选透明的材料薄片用于观察。

(6)适于观察的切片应该具有薄且比较透明、组织结构完整的特点,否则要重新进行切片,直至符合此标准。

(7)使用镊子挑选出适于观察的薄片放在载玻片上,加滴去离子水后加盖盖玻片,张贴部位标签,便于编号、记录结果。

(8)置于显微镜下观察并拍照。

(9)切片方法分为横切与纵切,实验操作中对上叶片下叶片、叶柄、茎、等部位进行多次采样切片。

2.3花青素测定方法

2.3.1 甘薯花青素浓度测定步骤

(1)提取花青素【10】需要提前配制0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠缓冲液,配制总量为200mL,具体配比为磷酸氢二钠固体称取3.5814g,柠檬酸固体称取3.8428g。

(2)选取新鲜实验部位,清洗晾干后,准确称取1.000g,加入少量缓冲液手工研磨,然后放入50ml离心管内,再加入适量的0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠缓冲液,最后定容至50ml。

(3)上下颠倒数次,振荡混匀后进行离心,离心机的设置为4,000 rpm 10min。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

(4)将实验样品取出后,在室温下静置30分钟,之后用分光光度计测定待测材料样品的吸光值,波长为530,详细记录每个实验样品的吸光度。。

(5)把测得的样品吸光度值,通过计算公式换算成花青苷质量含量,吸光值测量和换算计算。重复三次取平均值。

2.3.2甘薯花青素含量的计算方法

(1)以 Nano Drop ND100 UV-VIS 分光光度计测得的吸光度值计算公式[7]:

C=1/958×V/100×1/M×ABS×10×100000;

(2)以 Heλios 测得的吸光度值计算公式:C=1/958×V/100×1/M×ABS×100000。注:958:ABS 转换为质量体积比的经验系数;C:花青素含量,单位为 mg/100g (鲜薯);V:定容体积(ml);M:样品质量(g);ABS:分光光度计的吸光度值;100000:单位转换系数。

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