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烤鸭中水溶性提取物的体外抗氧化活性研究(8)

时间:2017-04-19 12:57来源:毕业论文
旋转蒸发器 台式离心机 RE-52AA TDL-5 上海亚荣生化仪器 上海安亭科学仪器厂 电子天平 AL204 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司 冰箱 KK26E28TI 西门子(中国


旋转蒸发器
台式离心机    RE-52AA
TDL-5    上海亚荣生化仪器
上海安亭科学仪器厂
电子天平    AL204    梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
冰箱    KK26E28TI    西门子(中国)有限公司

pH计    Delta320    梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
提取罐    /    天津市德固科技发展有限公司

2.2美拉德反应产物的提取制备
(1)将切碎的全聚德烤鸭的鸭肉2kg进行真空干燥,得到1200g样品。然后将样品水煮2次(每次2小时,煮制过程中要防止暴沸),用纱布把样品过滤,旋转蒸发至粘稠状,即粗提物。将粗提物放于4°C冰箱保存备用。
(2)称取10g样品,加入2L蒸馏水,超滤:将所得到的水溶性粗提物倒入超滤机中进行分离提纯,透过5000Da的超滤膜进行超滤分离,收集超滤所得的质量分数在5000以下的二次提取物并用旋转蒸发仪进行旋转蒸发,冷藏待用。
(3)凝胶柱层析:将超滤并旋转蒸发后的滤液按10%的浓度加入到凝胶层析柱中进行层析分离,最终分别得到了四个峰值处的的三次提取物,放置于4°C冰箱中保存,防止其变质。
2.3抗氧化活性研究方法
2.3.1清除DPPH自由基法[21]测定粗提物的抗氧化活性
DPPH•配制:
称取0.0394gDPPH溶解于100ml容量瓶,定容,摇匀,作为储备液(1.0×10-3mol/ L)避光保存于冰箱,用时逐级稀释(用乙醇溶解)。
测定:
将烤鸭样品用蒸馏水分别稀释成0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%)五种浓度的溶液。
(1)取待测样品2 mL及浓度为l.0×10-4mol/ L DPPH溶液2ml先后加入同一具塞试管中,摇匀,在黑暗中室温放置30 min,以乙醇为参比,在517nm测定其吸光度Ai。
(2)取2ml的乙醇与浓度为1.0×10-4mol/ L的 DPPH溶液2ml混合,摇匀,在黑暗中室温放置30 min,以乙醇为参比,在517nm测定其吸光度Ao。
(3)取2ml待测样品与2ml无水乙醇混合,摇匀,在黑暗中室温放置30 min,以乙醇为参比,在517nm测定其吸光度Aj。
每组做三次平行实验,取平均值。
根据下列公式计算提取液对DPPH的抑制率,即:
抑制率(%) =(1-(Ai-Aj)/Ao)×100%(1)
式中:Ai为加抗氧化剂后DPPH溶液的吸光度;A0为末加抗氧化剂时DPPH溶液的吸光度;Aj为待测样品在测定波长的吸光度。Aj是为了消除浸提液本身颜色对测定的干扰。抑制率越大,抗氧化活性越高。
2.3.2 ABTS法测[22]测定粗提物的抗氧化活性
ABTS自由基的制备:
(1)7mmol/L ABTS的配制:称取0.0960g ABTS,用蒸馏水定容到25ml。
(2)140mmol/L K2S2O8 (过硫酸钾)的配制:称取0.3784g K2S2O8,用蒸馏水定容到10ml。
(3)ABTS储备液的配制:5ml 7mmol/L ABTS 加88μl 140mmol/L K2S2O8,在室温、避光条件下静置过夜,形成ABTS储备液。使用前用无水乙醇稀释成工作液,要求在734nm波长下吸光度值为0.7±0.02。
测定:
将烤鸭样品用蒸馏水分别稀释成0.25%、0.5%、1%、2%、4%五种浓度的溶液。
准确量取9.8ml的ABTS•+工作液于试管中,加入200ul的样品溶液,摇匀后静置5min,以蒸馏水为参比,在734nm波长下测其吸光度Ai;同时测定9.8mlABTS•+工作液与200ul无水乙醇混合液的吸光度Ao,9.8ml的无水乙醇与200ul的样品溶液的混合液的吸光度Aj。 烤鸭中水溶性提取物的体外抗氧化活性研究(8):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_5283.html
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