Solution A: 22。79 g 氯化钠，3。98 g 硫酸钠，0。72 g 氯化钾，0。27 g 氯化铵，47。2 mg 磷酸氢二钠，83 mg 溴化钠，31 mg 碳酸氢钠，27 mg硼酸，2。6 mg氟化钠，1。3 g TAPSO，890 ml蒸馏水，调节pH至7。6，高温高压灭菌；Solution B：11。18 g 六水合氯化镁，1。46 g 二水和氯化钙，24 mg 六水合氯化锶，100 ml 蒸馏水，高温高压灭菌；Solution C:0。02 g 四水合四氯化铁，100 ml 蒸馏水，G6玻璃砂漏斗过滤灭菌[7]；海水无机液体培养基：890 ml Solution A，100 毫升 Solution B，10ml Solution C；海水营养液体培养基：890 ml Solution A，100 毫升 Solution B，10 ml Solution C，2 g/L 胰蛋白胨，1 g/L 酵母提取物；海水营养固体培养基：890 ml Solution A，100 ml Solution B，10 ml Solution C，2 g/L 胰蛋白胨，1 g/L 酵母提取物，2%琼脂粉。含有萘的培养基（以萘作为唯一碳源）：将萘融于丙酮，过滤除菌，然后加入基础培养基中，萘浓度为20mg/L。

1。1。3 菌株的分离纯化 

取样品海水20毫升加入到以萘为唯一碳源的海水无机液体培养基中，设定摇床条件：250 r/min，温度35℃，48h。重复上述步骤3次。培养3代后，逐级梯度稀释菌液，在超净台中取200微升菌液分别涂布到海水营养固体平板上。35℃恒温箱静置培养，至菌落长成。挑取平板上长出来的单菌落，在含有萘的固体平板上进行三区划线培养，经过多次三区划线培养后，得到纯化菌株单菌落；最终挑取单菌落，接种到以萘为唯一碳源的海水无机培养基中，设定摇床条件：250 r/min，温度35℃，48h。培养液变浑浊，得到菌株LYG16。培养得到单菌落后一部分用无菌超纯水洗脱，用40%甘油在-70℃以下超低温保存备用，另一部分的单菌落继续培养用于实验研究。

1。2 实验方法

1。2。1 菌落形态观察、鉴定 

取分离纯化后的菌种以萘为唯一碳源的海水无机培养基中上划线，置于35℃恒温箱中培养，等到细菌生长至对数生长期之后，菌落大小稳定，观察菌落形态，对菌落的状态进行描述。并取上述的细胞，进行扫描电子显微镜观察，细菌细胞形态，确定其是否有鞭毛，并测定菌体大小。接着对菌株进行革兰氏染色，在10 X 40倍光学显微镜下观察，鉴别细菌。

1。2。2 菌株的生理生化特性 来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

底物的利用：以海洋无机培养基为基础培养基，另外包括Biology通用的碳源的糖、醇、酸作为唯一碳源，检测菌株的生长情况[14]。

1。2。3 对16S rDNA基因的进行PCR扩增 

挑取平板上的单菌落配制成菌悬液，用加热煮沸法破坏细菌的细胞壁，用上海生物工程有限公司的PCR扩增试剂盒对LYG16菌株的16S rDNA进行扩增，PCR试剂使用配方如下表1所示，其中上游引物为Escherichia coli bases 8 to 27: 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’,下游引物为Escherichia coli bases 1507 to 1492: 5’-TACCTTGTTACGACTT -3’ [15]。50微升体系PCR试剂使用量与PCR条