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茶树(Camellia sinensis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)抗体的制备及纯化 (3)

时间:2018-08-01 14:20来源:毕业论文
绪论图-2 茶树(Camellia sinensis) 一般来说,抗体具有特异性中和抗原、杀灭细菌、介导调理吞噬病毒、激活补体等免疫功能,从血清中提取抗体是最常见的


绪论图-2 茶树(Camellia sinensis)

一般来说,抗体具有特异性中和抗原、杀灭细菌、介导调理吞噬病毒、激活补体等免疫功能,从血清中提取抗体是最常见的方法之一。[21]本课题通过茶树Cystatin-福氏佐剂混合乳化作为抗原免疫小鼠获得抗血清,常见的免疫途径及优缺点,见绪论表-1。
绪论表-1常见免疫途径的优缺点[22]
途径    细节    优点    缺点    物种
皮下
(s.c.)    最常用优选途径,不要在捆绑固定的身体部位注射,注射点不要超过5个    可以注射相对大的体积,炎症过程易于监测    吸收慢    所有物种
肌肉注射
(i.m.)    骨骼肌血管丰富    快速吸收;特别是对大型动物,可以注射相对大的体积    注射到封闭空间,在肌肉中易引起疼痛;抗原和佐剂沿着界面和神经束扩散,易损伤神经或产生其他严重副作用    不推荐在啮齿动物中注射油性佐剂
腹腔
(i.p.)    抗原提呈的有效途径(由呼吸活动帮助转运,容易进入淋巴)    相对大的接种体积    注射失败率相对较高,油性佐剂易产生腹膜炎,增加注射过敏性休克风险    主要为啮齿动物
静脉
(i.v.)    不可溶性抗原不可用,抗原不推荐注射油性佐剂,抗原主要递送到脾脏,接着到淋巴结    抗原快速分布    增加注射过敏性休克风险    可用于所有物种,但仅为可溶性抗原
真皮
(i.d.)    每只动物免疫注射次数应少于5次    皮肤内高浓度树突状细胞快速递送抗原到淋巴结,少量抗原时即有效    使用油性佐剂引起溃疡    在啮齿动物中不推荐使用
采用腹腔注射免疫,免疫5周取血测效价,若达到理想值,即成功获得抗体。
茶树Cystatin抗体纯化简介
效价高的免疫血清对传染病的诊断与治疗、抗原分析、免疫球蛋白的鉴定以及其他研究有重要用途。[23]抗体纯化能够提高抗体纯度、效价,对抗体的后续使用具有重要意义。常见的抗体纯化方法如下[24]。
绪论表-2 常见的抗体纯化方法[24]
方法    容易程度    成本    适用性    特异性    主要用途    缺点    大样本纯化
硫酸铵/辛酸沉淀    非常容易    廉价    适用于所有血清和腹水,不适用培养上清    无    增加抗体的浓度    抗体纯度不高    可以
阴离子交换层析    稍有困难,必须知道抗体pH    中等廉价    适合大多数的抗体及亚型    无    适于去除非抗体蛋白、蛋白质A、DNA、内毒素反转录病毒。加样和洗涤过程中免疫球蛋白是可溶性的    对有些抗体纯化能力有限,DNA易与基质不可逆的结合    可以
阳离子交换层析    稍有困难,必须知道抗体pH    中等廉价    适合大多数的抗体及亚型    无    适于去除非抗体蛋白、蛋白质A。对免疫球蛋白有高结合力    对去除DNA及内毒素的效果中等。最佳结合条件可能会使某些免疫球蛋白沉淀。缓冲液会失效    可以
方法    容易程度    成本    适用性    特异性    主要用途    缺点    大样本纯化 茶树(Camellia sinensis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)抗体的制备及纯化 (3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_20792.html
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