僵蚕与蜈蚣醇提取抗惊厥作用的药效学比较
本实验结合中医理论,按照化痰、息风、行气、补气、泻火的治疗原则,选取僵蚕(SS)和蜈蚣(CP)的醇提物作为研究对象,利用经典的最大电休克惊厥(MES)、戊四唑(MET)惊厥模型,对抗痫西药为阳性对照,对两种中药提取成分的量效、时效、效能、效价进行比较研究;同时采用药效法,模拟两药的体内过程。为中医药治疗癫痫提供理论依据,为抗痫新药开发利用奠定药理学理论基础。
1 材料
1.1动物 健康普通级昆明种小鼠,体重18-22g,雌、雄皆用,符合国家健康一级动物标准。
1.2药品及试剂
1.2.1药品 实验用蜈蚣、僵蚕,均为全虫,经山西医科大学药学系植化教研组鉴定后用于实验;拉莫三嗪,用生理盐水配制。
1.2.2药品的加工 蜈蚣、僵蚕的乙醇回流提取:将生药材研碎后,加入相当于药材量的4倍体积的65%的乙醇,浸泡24h然后用回流方法加热煎煮2次,每次1.5h,纱布过滤,合并2次滤液,用旋转蒸发仪均浓缩成400%(W/V)溶液;上述药材加工完毕后均置于冰箱冷藏备用;使用时用蒸馏水稀释至所需浓度。
1.2.3试剂 MET;无水乙醇为分析醇,用蒸馏水配制至所需浓度。
1.3仪器 JY-Ⅱ型电惊厥仪;圆底回流装置;旋转蒸发仪RE-52AA;DZTW型调温电热套。
2 方法
2.1MES实验
http://www.youerw.com/ 2.1.1MES模型的建立 采用Swinyard等的方法稍加改良。用两个耳电极夹住小鼠双耳部。电刺激参数:刺激强度100V、频率6Hz 、时间0.4s。以后肢强直为MES指标。
2.1.2实验动物分组及给药 取健康昆明种小鼠420只,雌、雄各半,分为4组,每组随机分为4-6个剂量组,每个剂量组20只,均采用灌胃给药法,正常对照组灌胃等容积的生理盐水,灌胃容量0.1ml/10g。各剂量组的给药剂量:僵蚕组为5、10、20、30、40g/kg;蜈蚣组为10、20、30、40g/kg;拉莫三嗪组为0.001、0.002、0.004、0.008、0.016、0.032g/kg。
2.1.3量效、时效关系的测定 各剂量组小鼠灌胃给药后,分别于15、30、45min,1、2、3……13h用上述同样参数刺激,记录抗MES数,计算抗惊率,分析各药作用高峰期的量效关系,用Bliss法计算各药的半数有效量ED50、ED95,比较各药的效价强度及效能。以各药最大剂量组不同时间点的抗MES结果作时效关系分析,比较各药的起效时间、达峰时间和作用持续时间。
2.2抗MET惊厥实验 取健康昆明种小鼠40只,雌、雄各半,随机分为4组,每组10只。
各药以抗MES惊厥的ED50为给药剂量:①僵蚕组18.74g/kg;②蜈蚣组19.43g/kg;③拉莫三嗪组0.0048g/kg;④正常对照组灌胃等容积的生理盐水;以上各组均采用灌胃给药法,灌胃容量0.1 ml/10g;于各药作用高峰期皮下注射(sc)MET 100mg/kg,以全身阵挛性惊厥为观察指标,记录惊厥潜伏期、惊厥数和死亡数,计算抗惊厥率和病死率。
2.3药效动力学研究方法
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