2．材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂
722s可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司
Aw-型智能水分活度仪：江苏无锡市碧波电子设备厂
移液枪：0.5-10、10-100、100-1000 ：大龙医疗设备（上海）有限公司
立式压力蒸汽灭菌锅LS-B50L：上海医用核子仪器厂
电子天平MP200B：上海精科实业有限公司
数显卡尺0-150mm：密测多友量仪（苏州）有限公司
2.1.2 鱼肉
新鲜的子鱼，购于附近的零售市场，宰杀片下鱼肉后运回实验室，与4℃保藏。
2.1.3 植物精油
冷榨姜油（Ginger oil）购自上海东氏香精香料有限公司。
2.1.4 实验试剂
营养琼脂（NA）、平板计数琼脂（PCA）、伊红美蓝琼脂（EMB）均购自上海中科昆虫生物技术开发有限公司。
MRS培养基 购自杭州天和微生物试剂有限公司。
魔芋胶，购于上海北连生物技术有限公司。
甘油、无水乙醇（分析纯）均购于上海国药集团药业股份有限公司。
2.1.5 微生物菌种
大肠杆菌（Escherichia coli, CICC20729）来自中国工业微生物菌种保藏管理中心，用 NA斜面培养基在37℃连续培养活化2次，待用。
菌悬液的制备:把活化后的菌挑取一环接种到50ml（250ml三角瓶）灭过菌的LB液体培养基中，在37℃下培养24小时，此时菌悬液浓度为107cells/ml。
2.2 实验方法
2.2.1 姜精油离体（in vitro）抑菌试验
参考姜黎明等的方法[18]，采用滤纸片扩散法考察不同浓度姜精油的离体抑菌效果。在NA培养基上加入200μl的大肠杆菌菌悬液（1×107cells/mL），涂布均匀。用打孔器将滤纸片制成直径为6mm的圆形纸片本文来自优/文(论*文?网，
毕业论文 www.youerw.com 加7位QQ324~9114找原文，于121 ℃下灭菌20min。用无菌镊子将滤纸片放于涂布好的培养基上，每皿贴3张。向滤纸片上分别滴加10μL不同浓度的姜精油，37℃下培养24h,测定抑菌圈直径，结果取3次重复实验的平均值。
2.2.2 魔芋胶-姜精油薄膜的构建
参考并改编Lai Hoong Cheng等人的方法[19]来制备魔芋胶-姜精油薄膜。将7g魔芋胶与2.1g甘油加入到1L蒸馏水中，混合搅拌15min。然后将混合物在30℃下静置1h后，分别加入浓度为0ml 0.625 mL、1.25mL的生姜精油，各取150mL倒到聚丙烯酸平板上，在室温下干燥20h。最后将干燥好的薄膜剥下，保存在五氧化二磷的干燥器中。
欧盟法律输出的历史与典型案例2.2.3 不同浓度的姜精油对魔芋胶-姜精油薄膜厚度（film thickness）的影响
在制备好的不同浓度的魔芋胶-姜精油薄膜的周围随机取点，用数显游标卡尺测量薄膜的厚度，精确到0.001mm，每个浓度的薄膜至少去10个点，每个点测量3次，取平均值。每组做两个平行试验。
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