产醇脱氢酶埃切毕赤酵母的发酵优化及其催化 第9页

4.2 氮源优化
4.2.1 氮源种类对生长及产酶的影响
选择氯化铵，硫酸铵，蛋白胨，牛肉膏，聚蛋白胨，酵母膏等氮源，以10g/L加入培养基，其余成分为（g/L）：蛋白胨5 g/L，酵母膏5 g/L，KH2PO4 0.5 g/L，K2HPO4 0.5 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO4•7H2O 0.5 g/L pH7.0。测定其发酵液终pH、OD值及酶活，并做一组平行试验，结果见如下表4.3。
表4.3 氮源种类对生长及产酶的影响
N源 OD值 总酶活(U/L) 比酶活(U/g) 转化率均值
酵母膏 10.515 10.41  1.31  5.88%
蛋白胨 9.96 11.95  1.58  7.10%
硫酸铵 1.625 4.66  3.78  16.98%
硝酸钠 2.49 0.96  0.51  2.28%
空白 2.62 0.89  0.45  2.00%
 
图4.3 氮源种类对生长及产酶的影响

实验结果显示，蛋白胨总酶活最高，但是硫酸铵的比酶活是最高的。因此选用不同浓度的酵母优化，之后又用总氮源含量相同的不同比例的蛋白胨和硫酸铵进行
4.2.2 氮源組合比例对生长及产酶的影响
以总氮源量10g/L按不同蛋白胨和硫酸銨的比例进行优化，在基本培养基上分别加入如下比例蛋白胨和硫酸铵g/L），pH7.0。测定其发酵液终pH、OD值及酶活，并做一平行试验，结果见如下表4.4。                    

表4.4 复合氮源比例对生长及产酶的影响
复合氮源优化（g/L） OD值 总酶活(U/L) 比酶活(U/g)
蛋白胨 9.435 11.22 1.57
7-3 8.565 12.88 1.98
5-5 8.205 13.49 2.17
3-7 7.65 11.09 1.91
硫酸铵 2.045 4.61 2.97
 
图4.4 复合氮源比例对生长及产酶的影响
实验结果发现，当蛋白胨和硫酸铵比例为一比一时总酶活和酶活比是最高的，因此选择一比一为最适氮源组合。

4.2.3 复合氮源浓度的对生长及产酶的影响
选择蛋白胨和硫酸铵作为最适氮源后，分别选择蛋白胨与硫酸铵浓度为（g/L）5，10，15，20，25分别加入培养基中，pH7.0。测定其发酵液终pH、OD值及酶活，并做一组平行试验，结果见如下表4.5。

表4.5 复合氮源浓度对生长及产酶的影响
N源浓度（g/L） OD值 总酶活(U/L) 比酶活(U/g)
0 2.45 0.93 0.50
5 4.32 8.99 2.73
10 7.77 12.39 2.09
15 8.14 11.46 1.85
20 9.75 11.66 1.58
25 9.06 11.05 1.70

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