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产醇脱氢酶埃切毕赤酵母的发酵优化及其催化第5页

更新时间：2016-10-23: 来源：毕业论文

1.7.1碳源的影响
改变初始产酶培养基中碳源的种类，分别以不同百分比（n％的加入量，V/V）的可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖和玉米粉作为碳源进行最适碳源的筛选。以筛选出的最佳碳源为碳源。
1.7.2 初始pH的影响
酶作用的最适pH值。在测定酶活的反应体系中加入磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液(pH值8．0)，调节pH值分别为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10．0，确定酶作用的最适pH值。
1.7.3 氮源的影响
氮源在微生物的生长代谢中发挥着举足轻重的作用，合适的氮源能显著增加脂肪酶的产量。尿素、牛肉膏、黄豆粉、蛋白胨等氮源对菌株的产酶影响能力，以找出最适的氮源。
1.7.4 金属离子的影响
主要方法是在培养基中分别加入0.1％的各种常见的离子，研究不同离子的影响。

2 实验的技术路线和流程
2.1 产醇脱氢酶埃切毕赤酵母发酵条件的优化的技术路线
通过改变一系列合成反应的条件，研究对一株埃切毕赤酵母发酵其酶活力测定方法、及其利用紫外分光光度计测定OD值、反应体积和终点pH值，计算出生成物的总酶活和比酶活，并与文献结果比较，选取最佳的产酯酶微杆菌发酵反应条件。本论文对一株来源于埃切毕赤酵母的发酵进行了研究。系统研究了碳源、氮源、金属离子、pH值对发酵产酶的影响。
碳源优化 → 氮源优化 → 金属离子优化 → 初始pH值优化

图2.1埃切毕赤酵母发酵培养基优化技术路线图

3 试验方法与材料
3.1 实验材料
3.1.1 主要试剂
表3.1 主要试剂表
试剂级别生产厂家
蔗糖 A.R 国药集团化学试剂有限公司
无水甲醇 A.R. 上海凌峰化学试剂有限公司
无水氯化钙 A.R. 上海衢州巨化试剂有限公司
甘油 A.R. 国药集团化学试剂有限公司
尿素 A.R. 上海卡用生物技术有限公司
硫酸亚铁 A.R. 上海第二钢铁厂
氯化钠 A.R. 江苏强盛化工有限公司
硫酸镁 A.R. 上海金山区兴塔美兴化工厂
D-麦芽糖 B.R. 上海卡用生物技术有限公司
磷酸二氢钾 A.R. 上海凌峰化学试剂有限公司
磷酸氢二钾 A.R. 国药集团化学试剂有限公司
琼脂粉 B.R. 国药集团化学试剂有限公司
可溶性淀粉 A.R. 上海豪申化学试剂有限公司
柠檬酸 A.R. 上海化学试剂有限公司
蛋白胨 B.R 国药集团化学试剂有限公司
葡萄糖 A.R. 上海凌峰化学试剂有限公司
酵母膏 A.R. 国药集团化学试剂有限公司
硫酸锰 A.R. 上海金山区兴塔美兴化工厂
硫酸铁 A.R. 上海金山区兴塔美兴化工厂
硫酸锌 A.R. 上海金山区兴塔美兴化工厂