3.1.2 主要仪器
表3.2 主要仪器表
名称 型号 生产厂家
洁净工作台 上海汇龙仪表电子有限责任公司
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紫外可见分光光度计 7504 上海菁华科技仪器有限公司
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台式高速离心机 H1650-W 长沙相仪离心机仪器有限公司
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3.2 试验方法
3.2.1 优化前培养条件
斜面培养基：麦芽汁培养基131 g/L，琼脂20 g/L，蒸馏水 pH 6
酵母培养基：分别称取葡萄糖15 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏5 g/L，KH2PO4 0.5 g/L，K2HPO4 0.5 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO4•7H2O 0.5 g/L使得溶液最终pH 7.0，30℃，接种后置于摇床中180 rpm，培养48h。
3.2.2 优化培养条件
碳源优化：选择葡萄糖，蔗糖，麦芽糖，柠檬酸三钠，甘油作为唯一碳源，按照15g/L的量加入，其余成分为基本发酵培养基成分pH 7.0。测定其发酵液终pH、OD值及酶活。选取最佳的碳源按不同浓度分别加入培养基中，其余成分不变。测定其发酵液终pH、OD值及酶活。
氮源优化：选择酵母膏，蛋白胨，尿素，硫酸铵，硝酸钠等氮源，以10g/L加入培养基，其余成分为：最佳浓度的碳源，基本发酵培养基成分，pH7.0。测定其发酵液终pH、OD值及酶活。选取最佳的氮源按不同浓度以及最佳氮源不同浓度组合分别加入优化培养基中，其余成分不变。测定其发酵液终pH、OD值及酶活。
金属离子优化：基本发酵培养基成分：最佳浓度碳源，最佳浓度氮源，初始pH值7.0。在基本培养基基础上按1g/L的量分别添加金属离子MgSO4•7H2O；无水CaCl2，MnSO4•H2O；ZnSO4•7H2O；FeSO4•7H2O。再测定其发酵液终pH、OD值及酶活。选取最佳的金属离子按不同浓度分别加入优化培养基中，其余成分不变。测定其发酵液终pH、OD值及酶活。
初始pH值优化：基本发酵培养基成分：最佳浓度碳源，最佳浓度氮源，最佳最适离子和离子浓度浓度，调整初始发酵液pH值为3，4，5，6，7，8。测定其发酵液终pH、OD值及酶活。取最佳的pH值条件，再细化pH值条件。再测定其发酵液终pH、OD值及酶活。
每个样品做2个平行对照。
3.2.3 OD值的测定
取1ml发酵液，离心（4℃，7000rpm，5min），弃上层清液，以0.80%NaCl溶液洗涤同样条件离心1次，以同样的NaCl溶液为空白，将同样的发酵液稀释不同倍数，测定在600nm波长处的吸光度（OD600）。
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