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降糖药GLP-1外源性DNA残留检测(2)

时间:2020-06-17 21:14来源:毕业论文
2.2 受试药品利拉鲁肽工艺过程Ⅴ冻干粉;批号:A\B\C利拉鲁肽工艺过程Ⅶ冻干粉;批号:A\B\C成品冻干粉;批号:A\B\C研制单位:江苏万邦生化医药股份有


2.2 受试药品利拉鲁肽工艺过程Ⅴ冻干粉;批号:A\B\C利拉鲁肽工艺过程Ⅶ冻干粉;批号:A\B\C成品冻干粉;批号:A\B\C研制单位:江苏万邦生化医药股份有限公司。2.3 仪器与耗材荧光酶标仪:Twinkle LB970,RERTHOLD;WH-3微型旋涡混合仪:GENIE;黑色96 孔板:Costar 39252.4 方法2.4.1 DNA 残留测定方法PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒是基于使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的方法【4】。
2.4.1.1 样品储备液配制分别精密称利拉鲁肽工艺过程Ⅴ样品、 工艺过程Ⅶ 样品和成品各 100.0mg,置于 10ml 容量瓶中,用样品稀释液(TE Buffer)溶解,并定容至 10ml,分别制得样品溶液10.0mg/ml,分装,置于 4℃冰箱保存备用。2.4.1.2 DNA 测定操作步骤(1)工作染色液:试验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液室温融化,临用前精密吸取10ul 染色液加入2ml 稀释液中,混匀即得,避光保存。(2)DNA 标准品的配制:精密称取 BSA 10mg,加1900ul 稀释液与100ul DNA标准液,混匀,制成DNA 浓度为100ng/mL、BSA 为0.5%的标准品溶液。(3)酚氯仿法处理:取待处理的标准品溶液、供试品溶液各 700ul,加入700ul 的饱和酚溶液,置涡旋仪上充分振摇 10min,然后高速离心机 10000rpm离心10min;取上层水相,加入等体积的三氯甲烷,置涡旋仪上充分振摇 10min,同上离心,取上层水相,于通风橱中开盖放置 30分钟,将残留三氯甲烷挥发干净【2】。

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