不同血清型的Hps毒力和交叉保护性存在差异，因此对Hps的分型是很重要的，由此可区分致病菌株和非致病菌株。由于目前技术对s5和s12无法分型，本文将将两者合并讨论。我国流行血清型以s1、s4、s5（12）、s13为主[6]，因此本实验主要分此4种血清型。
目前较常用的分型方法为血清型分型法[7，8]，将待检菌株培养成菌液，灭活菌液制成疫苗给健康家兔攻毒并采集其血清鉴定抗体水平[9]。血清型分型法又分为琼脂免疫扩散实验、间接血凝实验、乳胶凝集试验、酶联免疫吸附试验[10]。除了血清型分型方法，另外还有基因分型法，包括限制性内切酶分析法[11]、肠杆菌基因间重复共有序列 PCR[12]、多基因座序列分析[13]、随机扩增多态性聚合酶链反应[14]。另外还有多态性图谱分型法包括外膜蛋白指纹图谱分型法[15]和多位点酶电泳图谱分型法。
由于国外学者已成功利用不同血清型荚膜多糖的不同基因序列合成副猪嗜血杆菌的15个血清型的引物，副猪嗜血杆菌的PCR分型方法也确立起来[16]。鉴于其快速、便捷、灵敏性和特异性较优等优点，PCR分型方法将在各个方面取代血清型分型方法。本研究将采用此方法，合成文献中已确定的Hps通用引物及各型引物，对实验室冻存的19株Hps阳性菌株进行s1、s4、s5（12）、s13的分型，建立PCR分型方法并探究引物特异性；应用此方法，对南京市桥北地区某猪场健康猪群采样进行Hps的检测并分型；采样时间为2016年11月。
1     实验部分
1.1    实验材料
1.1.1    主要试剂与器材   
试剂：PCR Mix（购于广州东胜）、TSB培养基、DNA提取试剂盒、凝胶电泳MARKER（DNA DL-2000）、DNA凝胶回收试剂盒、T载体、感受态细胞（trans5α）、提取质粒试剂盒等。
器材：超净台、离心机、PCR仪、电泳仪、37℃摇床、37℃温箱等。
1.1.2    细菌  
包括实验室冻存菌（已鉴定为Hps阳性）和猪场采集鼻拭子培养的细菌样品。
实验室冻存菌共19个，标记为1-19：（1）  N12 TZ0822、（2）  N23 XX0221、（3）  N14 TZ0831、（4）  N9 TZ0605、（5）  N4 DW0910、（6）  N18 XX0403、（7）  N13 TZ0831、（8）  N17 XX0221、（9）  N11 TZ0731、（10）  N21 HPS1、（11）  N22 DW0403、（12）  N1 DN0403、（13）  N20 XX0113、（14）  N7 TD0822、（15）  N8 TZ0414、（16）  N16 XX0115、（17）  N10 TZ0611、（18）  N15 XX0115、（19）  N19 XX0822。
猪场采集鼻拭子72个样，标记为1-72。
1.1.3    PCR引物
按文献报道的副猪嗜血杆菌基因特异引物序列合成Hps通用及Hps各型包括s1，s4，s5（12），s13引物（表1-1），由上海英潍捷基贸易有限公司合成。 副猪嗜血杆菌PCR分型方法的建立与应用(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_30134.html