本实验通过进行福林酚法、ABTS法、FRAP法这三种方法以了解葡萄籽提取物的抗氧化性效果，然后通过SDS-PAGE电泳法和清除乙二醛（GO）反应体系研究葡萄籽提取物对多不饱对和脂肪酸（鱼油）氧化修饰蛋白质（小牛血清白蛋白，BSA）模拟体系中的对蛋白的影响，进而研究葡萄籽提取物在食品油脂抗氧化方面的作用。利用易氧化的高度不饱和脂肪酸（鱼油产品），牛血清白蛋白（BSA），利用催化剂Fe2+/ascorbic acid模拟脂肪氧化修饰蛋白质的反应系统。葡萄籽提取物抑制蛋白质被修饰的作用是通过测定BSA中高分子量蛋白形成（SDS-PAGE法）以及清除乙二醛（GO）反应体系来进行评估的。利用该研究实验验证葡萄籽提取物真正的使用价值，为进一步将葡萄籽提取物这一天然植物提取物运用在食品开发中提供理论依据，以便为以后的深入探究提供有价值的参考。

2材料与仪器

2.1  实验材料与试剂

材料：葡萄籽提取物购自于西安天一生物技术有限公司，鱼油是浙江舟山奥旭鱼油制品有限公司馈赠。

试剂：维生素E（α-tocopherol），维生素C，吐温-80，吐温-20，牛血清白蛋白(BSA)，七水硫酸亚铁（FeSO4·7H2O），考马斯亮蓝R250，三氯化铁（FeCl3），蒸馏水，３０％Ａｃｒ－Ｂｉｓ，Tris-HCl，APS，SDS，ＴＥＭＥＤ，乙二醛（DO），pH7.4的磷酸盐，10%乙酸溶液，邻苯二胺，乙腈溶液等。

2.2  实验仪器与设备

 电热恒温水浴锅DK-S26，上海精宏实验设备有限公司；旋转蒸发仪RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂；旋涡混合器WH-866，华利达实验设备有限公司；循环水式真空泵，上海聚昆仪器设备有限公司；超声波清洗器KQ-500型，昆山市超声仪器有限公司；pH计PHS-3C，上海精科；离心机 Centrifuge 5430 eppendorf；离心机 Centrifuge 5810R eppendorf；恒温金属浴TU-10，上海一恒科技有限公司；XHF-D高速分散器，宁波新芝生物科技股份有限公司。紫外分光光度计，上海仪器有限公司制造；电热恒温水浴锅，购自上海精密实验设备有限公司。

3  实验方法

3.1葡萄籽提取物总多酚和抗氧化能力的测定

3.1.1福林酚法测总酚含量

实验方法参考[12]并做一些适当的改动。量取0.2 mL80%甲醇提取液，后把它用蒸馏水稀释到10 mL，然后向其加入1 mL福林酚试剂，混匀后再将5 mL 5%碳酸钠溶液加入，再次混匀后室温放置60 min，最后加蒸馏水至25 mL，于750nm下测量吸光度。在本实验方法中以没食子酸为标准样品作标准曲线，并且总酚含量用没食子酸当量GAE(gallic acid equivalent)表示。

3.1.2 ABTS自由基清除实验测定抗氧化能力 

实验方法参考[13]并做一些适当的改动。首先准确量取88 μL过硫酸钾溶液(140 mmol/L)和5mlABTS溶液(7mmol/L)并混合这两种溶液使它们发生避光反应，时间为12～16h。然后使用乙醇将ABTS溶液稀释至吸光度为0.7±0.002的条件。接着取4.9 mL的ABTS溶液和0.1 mL的80%甲醇提取液反应10min后于734 nm下测其吸光度。以溶于80%甲醇的Trolox溶液作为标样，并且以吸光度的减少值与Trolox浓度作标准曲线。源`自,优尔.文;论"文'网[www.youerw.com样品抗氧化能力用TEAC(trolox equivalent antioxidant capacity)表示，空白为0.1 mL80%甲醇。 

3.1.3 FRAP实验测定抗氧化能力

实验方法参考文献[13]并作一些适当改动。配制FRAP试剂方法：首先将0.1mol/L醋酸缓冲液(pH3.6):10mmol/LTPTZ混合溶于40mmol/L盐，混合时间10mi，然后放置593nm下测其吸光度。以溶于80%甲醇的Trolox溶液作为标样来作标准曲线。本实验方法以TEAC表示样品的抗氧化能力，空白对照组为0.1ml 80%甲醇。 葡萄籽提取物抑制高级脂肪氧化终产物生成的研究(3):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_55097.html