1。2。3 在食品中的应用 2

1。2。4 植酸降解物的生产 3

1。2。5 植物生产种植 3

1。2。6 在新工业领域的应用 3

1。3 植酸酶的生产效益 4

1。4 植酸酶的发展与现状 4

1。5 基因工程 5

1。5。1 重组DNA技术 5

1。5。2 重组DNA技术的发展 5

1。5。3 重组DNA技术的步骤与方法 6

1。5。4 重组DNA技术的应用 7

1。6 研究意义 7

第二章  实验材料与方法 9

2。1 材料、试剂和仪器 9

2。1。1 材料与试剂 9

2。1。2 实验仪器 9

2。2 实验方法 10

2。2。1 百合花粉总RNA的提取 10

2。2。2 引物设计 10

2。2。3 逆转录获取cDNA 11

2。2。4 PCR扩增反应 11

2。2。5 PCR扩增产物纯化与回收 12

2。2。6 载体处理 12

2。5。7 连接与转化 13

2。5。8 阳性克隆筛选 13

2。5。9 质粒抽提 14

2。5。10 酶切验证结果 15

第三章 结果与分析 16

3。1 PCR产物回收 16

3。2 载体处理 17

3。3 阳性克隆筛选 18

3。4 质粒浓度测定 19

3。5 酶切验证 19

3。6测序分析 20

3。7 讨论 21

结论 23

致谢 24

参考文献 25

第一章 文献综述

1。1 植酸酶及其分类

植酸酶是一类磷酸单酯酶，因其特殊的空间结构，植酸酶能够依次分离植酸分子中的磷，将植酸或植酸盐降解为肌醇和无机磷[1]。从广义概念上讲，植酸酶是一类能水解植酸并产生无机磷的酶[2]。论文网

关于植酸酶的分类，有多种分类方法。根据植酸酶的来源分类，植酸酶可分为来自于植物的植物植酸酶（如百合花粉植酸酶），从细菌中提取的细菌植酸酶（如芽孢杆菌植酸酶）和来自于真菌中的真菌植酸酶（如黑曲霉植酸酶）;根据植酸酶在不同pH中的活性，植酸酶可分为碱性植酸酶、中性植酸酶以及酸性植酸酶[3]。由UPAC-IUBMB确定，根据底物植酸的立体专一性对植酸酶进行分类，如：3-植酸酶(myo-inositol hexakisphosphate 3-phosphorylase, EC 3。1。3。8)、5-植酸酶(myo-inositol hexakisphosphate5-phosphorylase,EC3。1。3。72)和6-植酸酶(myo-inositolhexakisphosphate6-phos-phorylase,EC3。1。3。26)，这种需要对产物进行色谱分析的分类方法较为复杂。此外基于植酸酶本身的三维结构和催化机制，分为半胱氨酸磷酸(cysteinephosphatase,CP)，紫色酸性磷酸酶(purpleacidphosphatase,PAP)、β折叠桶磷酸酶(β-propelarphytase,BPP)、组氨酸酸性磷酸(histidineacidphosphatase,HAP)等[4]。这种分类方法由于其简单性，被大多数学者采纳。 百合花粉碱性植酸酶基因的克隆及其表达载体的构建(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_99519.html