摘 要：根据已报道的A。niger T21糖化酶淀粉结合结构域基因的序列，设计合成一对特异性引物，以A。niger 2316的总DNA为模板，通过PCR扩增得到了340bp的DNA片段，然后将糖化酶淀粉结合结构域基因片段克隆入pUC19质粒载体。对pUC19-GASBD进行测序，结果显示，GASBD基因片段含有324bp，编码108个氨基酸。用DNAMAN 6。0软件对A。 niger 2316 GASBD的核苷酸和氨基酸序列与已报道的其它曲霉糖化酶SBD进行同源性分析。经核苷酸序列比对结果显示，A。 niger 2316 GASBD的核苷酸序列与其他已报道的曲霉糖化酶SBD的核苷酸序列的同源性都在90%以上，而与A。 oryzae RIB40 糖化酶SBD相比仅有63。30%的同源性。经过氨基酸序列的比对，发现A。 niger 2316 SBD基因编码的氨基酸序列与其他已报道的曲霉糖化酶SBD有很高的序列相似性，而A。 niger 2316糖化酶淀粉结合结构域与A。 oryzae RIB40 糖化酶淀粉结合结构域相比仅有58。88%的同源性。76709
毕业论文关键词： 黑曲霉，糖化酶,淀粉结合结构域，克隆，同源性分析
Abstract : According to the sequence of GASBD gene from aspergillus niger , a pair of specific primers were designed and synthesized。 Using the genome DNA of aspergillus niger 2316 as template , the expected size of 340bp DNA fragment has got by Polymerase Chain Reaction (PCR)。 The GASBD gene fragment was cloned into plasmid vector pUC19，and the GASBD gene sequences were analyzed。 The results showed that, GASBD gene fragment contained 324bp, encoded 108 amino acids。 The nucleotide and amino acid sequences of A。niger 2316 GASBD were analyzed by DNAMAN 6。0 software, and the homology of GASBD with other Aspergillus enzyme was reported。 By nucleotide sequence alignment showed that，there have more than 90% homologues with other reported GASBD。 while compared with A。oryzae SBD RIB40, the A。niger 2316 GASBD nucleotide sequence has only 63。30% homology。 After the amino acid sequence comparison and we found the amino acid sequence of the gene encoding the A。 niger 2316 GASBD with other reported Aspergillus GASBD has a high sequence similarity。 while compared with A。oryzae RIB40 GASBD, the A。niger 2316 GASBD amino acid sequence has only 58。88% homology。
Keywords : Aspergillus niger, glucoamylase, SBD, clone, homology analysis
目录
1 前言 4
2 材料与方法 4
2。1 实验材料 4
2。1。1 菌株与质粒 4
2。1。2 主要试剂 4
2。1。3 主要仪器设备 5
2。1。4 培养基 5
2。2 实验方法 5
2。2。1 黑曲霉基因组DNA的提取 5
2。2。2 黑曲霉GASBD基因的PCR扩增 5
2。2。3 PCR产物的纯化、酶切与回收 6
2。2。4 重组质粒pUC19-GASBD的构建 6
2。2。5 同源性分析 6
3 结果与分析 6
3。1 黑曲霉GASBD基因的克隆 6
3。2 GASBD基因的测序 7
3。3 GASBD基因的同源性分析 7
结 论 10
参 考 文 献 11
致 谢 糖化酶淀粉结合结构域基因的克隆及同源性分析:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_88035.html