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番茄逆境响应基因SlNAC10的克隆及生物信息学分析(5)

时间:2021-07-24 15:54来源:毕业论文
(2)连接后的转化: a:将连接产物加入50mL大肠杆菌感受态中,轻轻混匀,水上静置20min。 b:将离心管放入42℃水浴锅热激1min30s。 c:静置于冰上2min。

     (2)连接后的转化:

              a:将连接产物加入50mL大肠杆菌感受态中,轻轻混匀,水上静置20min。

b:将离心管放入42℃水浴锅热激1min30s。

c:静置于冰上2min。

d:在超净台中向每管感受态中加入700μL液体LB培养基,37℃,150rpm,震荡60min(摇床)

e:常温下,7000rpm离心3min。

f:在超净台上吸取700微升上清,留下菌液和菌斑,打散菌斑,吸出放置在平板上,用棒涂干为止,然后用封口膜封住。 

g:放入37℃的烘箱培养12-16h至长出菌斑,取出放入4℃冰箱保存。

表5  PCR试剂使用配方

Table5  PCR reagent formulation

编号                                试剂                             使用量

1                            SlNAC10 PCR纯化产物                     15μL

2                          10×PCR Buffer(Mg2+ free)                   2.5μL

3                                MgCl2(25mM)                          1.5μL

4                                dATP(10mM)                        0.5μL

5                               γ-Taq酶(5U/μL)                       0.2μL

6                                   ddH2O                              5.5μL

表6  PCR试剂使用配方来!自~优尔论-文|网www.youerw.com A

Table 6  PCR reagent formulation

编号                            试剂                      使用量

1                      SlNAC10 PCR纯化产物                6.75μL

2                             PMD18-T                     0.75μL

3                             SolutionⅠ                     7.5μL

2.2.5 SLNAC10菌落PCR筛选阳性菌

试剂:SLNAC10 转化长出的菌落、10xBuffer、MgCl2(25mM)、dNTPs、引物M13F/R、Taq酶、菌液、ddH2O

方法:(1)将200mL离心管和移液枪以及白、蓝枪头放进超净台,然后开启紫外灯照射0.5h。

     (2)在超净台上操作,在200mL离心管中加入10mL的无菌水,再使用枪头挑取菌落放入无菌水中,混匀。

     (3)用移液枪吸取1mL充分混匀的菌液,加入到分装好的PCR体系(如表7)中,剩余9mL,4℃保存。

     (4)PCR程序如表8。 番茄逆境响应基因SlNAC10的克隆及生物信息学分析(5):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_78896.html

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