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番茄逆境响应基因SlNAC10的克隆及生物信息学分析(4)

时间:2021-07-24 15:54来源:毕业论文
2 dNTP 5L 3 MgSO4 3L 4 前引物 1L 5 后引物 1L 6 cDNA 1L 7 KOD酶 1L 8 H2O 33L 表4 PCR条件设置 Table 4 PCR conditions set 编号 温度 时间 1 94℃ 2min 2 98℃ 10s 3 56℃ 30s 4 68℃ 1mi

2                                dNTP                          5μL

3                               MgSO4                                       3μL

4                               前引物                          1μL

5                               后引物                          1μL

6                                cDNA                          1μL

7                               KOD酶                         1μL

8                                 H2O                          33μL

表4  PCR条件设置

Table 4  PCR conditions set

编号                             温度                         时间

1                               94℃                         2min

2                               98℃                          10s 

3                               56℃                          30s                                                                    

4                               68℃                        1min45s   

5                           2-4循环35次

6                               94℃                         2min    

7                                4℃                          ∞

2.2.4 PCR产物的连接与转化

试剂:Taq酶、SolutionⅠ、PMD18-T、DEPC水、DNA ligation Kit Ver. 2.0试剂盒(TaKaRa)、感受态大肠杆菌、LB培养基。

方法:(1)连接:a:25μL PCR加A尾体系如表5,72℃,30min后做连接。

                  b:使用DNA Ligation Kit Ver. 2.0试剂盒对以上步骤中获得的SlNAC10基因的纯化PCR产物和PMD18-T载体进行连接。体系如表6所示,16 °C连接过夜。 番茄逆境响应基因SlNAC10的克隆及生物信息学分析(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_78896.html

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