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微泡菌的3-脱氧-β-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶的研究(4)

时间:2021-07-24 15:47来源:毕业论文
醋酸钾(58.8g)、醋酸(23ml) 文献综述 ②再在烧杯中加入100ml去离子水,用磁力搅拌器搅拌溶解。 ③然后加入去离子水定容至200ml。 ④高压蒸汽灭菌锅灭

  醋酸钾(58.8g)、醋酸(23ml)文献综述

②再在烧杯中加入100ml去离子水,用磁力搅拌器搅拌溶解。

③然后加入去离子水定容至200ml。

④高压蒸汽灭菌锅灭菌后,4 保存。

(8)溴化乙锭溶液 (EB:10 mg/mL)的制备方法

①首先称量溴化乙锭1g,加入到100ml的烧杯中。

②然后加入100ml的去离子水,用磁力搅拌器经过数小时充分搅拌,直到溴化乙锭完全溶解为止。

③最后将溶液用棕色瓶封装,因为溴化乙锭见光易分解。 

提醒:EB染液的工作浓度一般为0.5 /ml。

(9)1 TE Buffer的配制方法

①量取下列溶液,置于100mL烧杯中

      1M Tris-HCl Buffer(pH 8.0)        1ml

      0.5M EDTA(pH 8.0)              0.2ml

②向烧杯中加入98.8ml的去离子水,均匀混合。

③将溶液定容至100ml后,高温高压灭菌。

④室温保存

2.2  CaCl2法制备JM109感受态

(1)取大肠杆菌JM109冰上融解,平板划线。

(2)从LB平板上挑取新活化的单菌JM109接种于3ml的试管中,37 的恒温摇床中振荡培养12h。

(3)取400 的菌液接种于40mlLB液体培养基中,37 的恒温摇床中振荡培养3h至OD=0.3—0.4。

(4)将菌液转入10ml的离心管(4管),冰置10min(摇动)。

(5)保存至4 ,5000r/min离心5min,弃上清液。

(6)加1/2体积(第4步菌液体积,即5ml)0.1M预冷CaCl2,用枪吹打,冰置30min。

(7)保存至4 ,5000r/min离心9min,弃上清液。

(8)加1/10体积(同6)0.1M预冷CaCl2悬浮细胞。

(9)分装,200 感受态与100  30%的甘油混匀,在-80 下储存。

(10)检测,涂平板,在LB培养基中能生长,而在加抗生素的LB培养基中不能生长。

2.3  SDS碱裂解法制备质粒来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

(1)培养液8000r/min,离心3min,弃上清液。

(2)加150  Solution Ⅰ漩涡混匀,转移至1.5ml的离心管。

(3)加150  Solution Ⅱ,翻转5—8次。

(4)加150  Solution Ⅲ,翻转5—8次。

(5)14000r/min,离心10min。

(6)取上清液,加900 的无水乙醇离心,14000r/min,离心6min。

(7)弃上清液,加800 的70%乙醇洗沉淀,14000r/min,离心1min。

(8)弃上清液,沉淀中多余的酒精用真空泵吸干。

(9)37 敞口烘干20—30min。

(10)加入60  RNase,37 水浴30min,消化RNA。

微泡菌的3-脱氧-β-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶的研究(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_78891.html
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