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微泡菌的3-脱氧-β-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶的研究(3)

时间:2021-07-24 15:47来源:毕业论文
(3)Primestar Mix(2 ):宝生物工程有限公司 (4)Seamless Cloning Master Mix:上海生工生物科技有限公司 (5) XhoⅠ、NdeⅠ、SalⅠ:宝生物工程有限公司 1.3 普通试剂

   (3)Primestar Mix(2 ):宝生物工程有限公司

   (4)Seamless Cloning Master Mix:上海生工生物科技有限公司

(5) XhoⅠ、NdeⅠ、SalⅠ:宝生物工程有限公司

1.3  普通试剂

蛋白胨、酵母粉、氯化钠、琼脂粉、去离子、溴化乙锭、Tris 、HCl、Glucose、Na2EDTA·2H2O 、EDTA、SDS、NaOH、KOAc、CH3COOH、氨苄青霉素[Amp]。以上的试剂都于上海生工生物科技有限公司购买。

1.4  缓冲液和溶液

50 × TAE缓冲液、溴化乙锭溶液 (EB:10 mg/mL)、TSolutionI、SolutionII 、SolutionIII(pH < 4.8)、E-RNase缓冲液、1 TE Buffer缓冲液、LB液体培养基、LB固体培养基(+100 mg/ml的氨苄青霉素[Amp]) 。

1.5  仪器设备

漩涡混合器XH-C(金坛市)、台式离心机TGL-16B(上海)、天呈恒温摇床TS-200B(上海)、定时恒温磁力搅拌器90-2(上海)、Eppendorf移液器系列1000μL, 200μL, 100μL, 10μL, 2.5μL(德国)、全自动电脑干燥箱DHG-9240C(杭州)、立式压力蒸汽灭菌器LDEX-50FBS(上海)、凝胶成像分析系统GELX1520(上海)、制冰机FM70A(中国格兰特)、低速式大容量离心机(上海)、PCR仪MG96+(杭州)、格兰仕微波炉WD700(佛山格兰仕公司)、电子天平BX320D(德国Sartorious)、三恒电泳仪EPC3000(北京六一)、PCR仪MG96+(杭州)、紫外分光光度计UV-7504(中国)、电冰箱海尔BCD-271TMCM(青岛)。

2 方法

2.1 相关溶液制备

(1)LB培养基的制备方法

①首先称取以下试剂,放置于1L的烧杯中。

  胰蛋白胨(10g)、酵母提取物(5g)、NaCl(10g)

②大约加入800ml的去离子水,用磁力搅拌器充分搅拌,将其溶解。

③再滴加5N NaOH,将pH值调节至7.0。

④然后加入去离子水将溶液定容至1L。

⑤高压蒸汽灭菌锅灭菌后,最后4 保存。

(2)LB/Amp培养基的制备方法

①首先称取以下试剂,放置于1L的烧杯中。

  胰蛋白胨(10g)、酵母提取物(5g)、NaCl(10g)

②大约加入800ml的去离子水,用磁力搅拌器充分搅拌,将其溶解。

③再滴加5N NaOH,将pH值调节至7.0。

④然后加去离子水将溶液定容至1L。

⑤高压蒸汽灭菌锅灭菌后,等待冷却至室温。

⑥最后加入1ml Ampicillin(100mg/ml),均匀混合,4 保存。

(3)50 TAE Buffer的制备方法

①首先称量以下试剂,放置于1L的烧杯中。

  Tris(108g)、Na2EDTA·2H2O(7.44g)

②在烧杯中大约加入800ml的去离子水,用磁力搅拌器充分搅拌,将其溶解。

③然后加入57.1ml的醋酸,用磁力搅拌器充分搅拌。

④最后用去离子水定容至1L后,室温保存。

(4)TE-RNase缓冲液

①首先将10 µg/L 的RNase加入TE溶液中。

②高压蒸汽灭菌锅灭菌后,4℃保存。

(5)Solution Ⅰ的制备方法

①首先量取以下溶液,放置于200ml的烧杯中。

  1M Tris-HCl(pH8.0)(5ml)、0.5M EDTA(pH8.0)(4ml)、20% Glucose(1.11M)(10ml)、灭菌水(181ml)

②高压蒸汽灭菌锅灭菌后,4 保存。

(6)Solution Ⅱ的制备方法

①首先量取以下溶液,放置于200ml的烧杯中。

  10%SDS(20ml)、2N NaOH(4ml)、灭菌水(176ml)

②然后加入灭菌水将溶液定容至200ml,用磁力搅拌器充分混匀。

③室温保存,而且此溶液配制一个月后就不能使用。

(7)Solution Ⅲ的制备方法

①首先称量以下试剂,放置于200ml的烧杯中。 微泡菌的3-脱氧-β-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶的研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_78891.html

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