摘要：本文通过拟南芥为材料，通过对拟南芥数据库及相关文献的分析，运用CTAB法提取得到拟南芥ABA响应启动子AtRab。以拟南芥基因组DNA为模板，通过PCR技术克隆得到AtRab，并进一步与载体连接，从而使其插入pBI01质粒而获得重组质粒。并进一步进行酶切，连接，转化，提取质粒，鉴定分析等一系列的实验步骤。本文的目的是通过PCR克隆拟南芥ABA响应启动子，并通过报告基因GUS在植物中来验证其功能，为进一步构建含有ABA响应启动子和目的基因做准备。20531
关键字： 拟南芥；ABA响应启动子；植物表达载体
ARABIDOPSIS THALIANA ABA RESPONSE PROMOTER CLONING AND DRIVING REPORT OF THE CONSTRUCTION OF PIANT EXPRESSION VECTOR OF GENES
Abstract：In this paper, Arabidopsis thaliana was taken as plant materials After analysis of Arabidopsis genome database and related literature, Arabidopsis AtRab , an ABA response promoter, was extracted using the CTAB method, AtRab promoter was obtained by PCR cloning technology, and was further connected with the T-vector. AtRab promoter was confirmed by confirmed by sequencing. It was inserted into pBI01 plasmid , an expression vector, which was obtained by recombinantion.The purpose of this article is to clone Arabidopsis ABA response promoter, verify its function in the plant.and prepare for constructing expression vector containing useful gene driven by an ABA response promoter.
Keywords: Arabidopsis thaliana；ABA response promoter；plant expression vector
目 录
1. 绪论 1
1.1 拟南芥背景1
1.1.1 拟南芥物种简介1
1.1.2 拟南芥生物学特性1
1.1.3 拟南芥ABA响应启动子的克隆策略2
1.2 ABA响应启动子2
1.2.1 ABA简介2
1.2.2 启动子简介3
1.3 植物表达载体的构建及报告基因3
1.3.1 Ti质粒的发展3
1.3.2 Ti质粒的结构及功能3
1.3.3 Ti质粒的转化机理4
1.3.4 植物表达载体的构建4
1.3.5 报告基因4
1.4 实验的目的与意义4
2. 实验材料、方法与结果分析6
2.1 大肠杆菌感受态制备6
2.1.1 实验材料6
2.1.2 实验试剂6
2.1.3 实验器具和仪器设备6
2.1.4 实验方法6
2.2拟南芥（AT）genone DNA提取（CTAB法）6
2.2.1 实验材料6
2.2.2 实验试剂7
2.2.3 实验器具和仪器设备7
2.2.4 实验方法7
2.3 PCR反应（聚合酶链式反应）方法概述7
2.4 AtRab12扩大培养8
2.4.1 实验方法8
2.4.2 实验结果与分析10
2.5 构建载体T-AtRab1211
2.5.1 实验方法11
2.5.2 实验结果与分析11
2.6 AtRab34扩大培养12
2.6.1 实验方法12
2.6.2 实验结果与分析13
2.7 构建载体T-AtRab3413
2.7.1 实验方法13
2.7.2 实验结果与分析14
2.8 构建载体pBI101-AtRab34：：gus14
2.8.1 PBI101简介14
2.8.2 实验材料15
2.8.3 实验试剂15
2.8.4 实验器具和仪器设备15
2.8.5 实验原理15
2.8.6 实验方法15
2.8.7 实验结果与分析18
2.9 构建载体PBI101-1-AtRab1819
2.9.1 实验材料19
2.9.2 实验试剂19
2.9.3 实验器具和仪器设备19
2.9.4 实验原理19
2.9.5 实验方法20
2.9.6 实验结果与分析22
3. 总结24
致谢 25
参考文献 26
第一章： 绪论
1.1 拟南芥背景
1.1.1 拟南芥物种简介
拟南芥（Arabidopsis thaliana）属于被子植物门，双子叶植物纲，十字花科植物。 二年生的草本类植物，分别在我国陕西、甘肃、山东、内蒙、新疆、西藏、江苏、四川、云南、安徽、湖北等地区都有发现。拟南芥的优点是植株小、结子多。拟南芥的基因组是目前已知植物基因组中最小的。拟南芥是一种自花受粉的植物，具有高度纯合基因，用理化因素处理将会产生很高突变率，极其容易获得各种代谢功能缺陷型。由于有上述优点，拟南芥是进行遗传学研究很好的植物材料之一，被很多科学家称为“植物中的果蝇”。虽然没有较大的经济价值，但由于它具有一些独特的生物学、遗传学及分子生物学的性质等特点，而成为植物分子遗传学发展中最受欢迎的模式植物(model plant)之一。尤其是在2000年底已经完成了对拟南芥整套的基因组的测序研究，使得拟南芥基因克隆，结构与功能的探索有了突飞猛进的发展条件。而拟南芥基因和功能的深入研究，必将推进农业、人类健康、环境等多个方面的巨大进步。而现在已有很多的科学家投身于拟南芥的探索，拟南芥的研究也因此而越来越广泛，越来越深远。 拟南芥ABA响应启动子的克隆及驱动报告基因的植物表达载体的构建:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_12344.html