1.1.1 MALDI定性分析

    MALDI质谱广泛应用于蛋白质、糖、核酸等大生物分子以及合成高聚物分子的分子量测定和结构分析，成为当前蛋白质组学研究的核心技术之一。MALDI常应用于化合物的定性分析，原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比 ，检测离子。但MALDI应用于定量分析的研究还很局限，原因是其信号的重现性差。

但是MALDI用于定量分析的实例还是很多，但大多数实验所得到的结果重现性不好，这不能作为一套好的定量分析的方案，所以，如何选择基体、内标物以及好的实验方案，也决定了实验结果的重现性。

本课题通过对大量文献的研究阅读，比较不同定量分析方法所得到的结果的重复性，形成一套新的重复性较好的实验方案，一般的实验得到的重复性为10%到20%，但对于好的研究实验方案来说这还不够好。本课题通过对不同实验方案的比较和结合，期望得到重现性能在10%以下的结果。能使MALDI在定量分析中更精确、准确的分析化合物。

1.1.2 MALDI定量分析

    质谱被广泛用于有机化学中分子结构和分子量的测定,尤其在对微量化合物分析时,质谱法几乎是唯一测定结构和分子量的方法。通常这种传统的质谱方法能够很好测定一些分子量较小<(1000Da)的化合物,但对于生物样品而言,由于其极性大、难挥发、不易气化且热不稳定的特点,传统质谱方法就无能为力了。                                                        

所以以激光轰击样品,得到样品准分子离子峰进行质谱分析的激光解吸电离质谱技术的出现了。经过20多年的系统考察后,人们得出: (a)在所处的激光波长范围内,分子必须有很强的吸收才能发生有效且可控的能量转移,因此能使分子的电子态激发的远紫外和能使分子的振动态激发的远红外激光光源最为合适;（b）为了避免热不稳定分子发生热分解,能量转移必须在很短的时间内完成,通常使用宽度在1到10Ons范围内的脉冲激光来满足这一条件。  

 MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比 ，检测离子。

 MALDI对样品中较高浓度的盐、缓冲剂和其他非挥发性成分有很好的抗干扰能力,前提是这些物质必须不影响结晶的性质。同时MALDI对混合物可不预先分离而进行分析,这点相对其他质谱技术如电喷雾而言显出其优越性。因此在生物工程药物分析中可作为目标蛋白纯度和分子量测定的手段,也能直接用于蛋白质的酶解或化学降解产物的分析。

1.1.3 定量局限性

MALDI定量局限性：在定性分析中有很大的作用，但是在定量分析的领域却局限于蛋白质、多肽、小分子的研究，主要原因为其重现性差。因为分析物的信号强度不仅与基质和待分析物形成的共结晶形状大小、待测物在晶体中的分布有关，还和激光强度等有关。由于样品在晶体中分布为非均相，离子化程度不一样，激光强度也很难保持一致，所以很难用质谱峰强度来绝对定量分析。 MALDI质谱分析定量重复性的研究(3):http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_49022.html