2.1番茄RNA的提取、cDNA的制备和LeCOI1的扩增结果电泳图片分析
取番茄幼苗叶片进行RNA的提取，得到番茄植株的RNA(见图1)；采用RT-PCR技术，以RNA为模板得到番茄总cDNA(见图2)；以cDNA为模板扩增出约360bp的序列片段(见图3)，与目的基因片段(361bp)大小一致。
图1 番茄MM的RNA电泳图
图2 番茄cDNA电泳图
注：1：番茄cDNA；M：DL2000 marker
图3 PCR扩增所得LeCOI1基因片段电泳图
注：1：目的基因LeCOI1；M：DL2000 marker
2.2重组载体pMD18-T-LeCOI1的鉴定
以pMD18-T-LeCOI1阳性克隆质粒为模板进行PCR质粒验证后，得到了与目的基因大小相一致的序列；而以ddH2O为模板作为对照实验未发现条带(见图4)。初步表明pMD18-T-LeCOI1重组载体构建成功。将所得产物则送至南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序鉴定后得到361bp大小的序列，经NCBI的BLAST程序比对分析后发现与目的基因具有100%的同源性，表明pMD18-T-LeCOI1载体构建成功，所扩增序列即为目的序列。
图4 重组载体pMD18-T-LeCOI1质粒验证电泳图
注：M: DL5000 marker；1-3：重组载体pMD18-T-LeCOI1质粒验证；4：阴性对照
2.3 pYY13单酶切电泳结果
对已保存的pYY13菌株进行质粒提取(见图5-1)，经PstⅠ单酶切后可从凝胶电泳中于750bp处可发现较明显的切下来的片段(见图5-2)，表明单酶切成功，可用于下一步的载体构建实验。
图5 pYY13质粒
注：M: DL2000 marker；1：酶切前的pYY13；2：酶切后的pYY13
2.4 pYY13-LeCOI1重组质粒的验证
对pYY13-LeCOI1重组载体PCR验证后发现：以pYY13-LeCOI1阳性克隆质粒为模板进行PCR质粒验证后可得到了与目的基因大小相一致的序列；而以pYY13空载为模板作为对照实验未发现条带(见图6)。所得产物测序鉴定后得到的序列经NCBI网站的BLAST比对分析后发现与目的基因高度同源，表明pYY13-LeCOI1重组载体构建成功。
图6 重组载体pYY13-LeCOI1质粒验证电泳图
注：M: DL5000 marker；1：重组载体pYY13-LeCOI1质粒验证；2：空pYY13质粒
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