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免疫组化技术在PD脑内炎症研究中的应用(3)

时间:2023-08-22 21:33来源:毕业论文
1。试验材料 1。1实验动物 1。1。1 健康成年雄性Sprague-Dawleg(SD)大鼠,体重约200~250 g,杭州师范大学动物实验中心提供,所有动物实验遵照国家实验动物饲

1。试验材料

1。1实验动物

1。1。1 健康成年雄性Sprague-Dawleg(SD)大鼠,体重约200~250 g,杭州师范大学动物实验中心提供,所有动物实验遵照国家实验动物饲养和使用指南,大鼠称重分笼饲养,自由进食和饮水,12小时明暗循环,室温22~25 ℃;C57BL/6小鼠,雄性,体重为18~22g,购于杭州师范大学动物实验中心,动物合格证号:SCXK(浙)2008-0033。所有动物实验遵照国家实验动物饲养和使用指南,小鼠分笼饲养,自由饮食和饮水,12小时明暗循环,室温22~25℃。

1。1。2  C57BL/6小鼠分笼饲养,所有动物实验遵照国家实验动物饲养和使用指南,自由饮食和饮水,12小时明暗循环,室温22~25℃。

1。2药物和试剂

1。2。1 药品:脂多糖(LPS,美国 Sigma); MPTP溶液(30mg/kg)

1。2。2 脑组织取备试剂:10%甲醛;生理盐水;

1。2。3 免疫组化试剂:羊源Anti-iba-1抗体(购自英国Abcam公司),标准胎牛血清白蛋白(北京鼎国生物技术有限责任公司),PV-9003抗羊超敏二步法检测试剂盒,DAB显色试剂盒,枸橼酸钠,免疫组化液体石蜡笔(均购自北京中杉金桥生物技术有限公司);

1。2。4其他试剂:多聚赖氨酸溶液0。1%(购自上海生工生物工程有限公司),水合氯醛、二甲苯、无水乙醇等均为国产或进口分析纯产品。

1。3实验仪器和材料论文网

显微镜(YS100,日本Nikon公司);石蜡切片机(RM2235,德国Leica公司);漂片烤片仪(HI1210,德国Leica公司); Mettler Toledo酸度计(上海捷辰仪器有限公司);电子天平(AL104,上海Metter Toledo仪器有限公司);超纯水仪(Direct-Q3,美国Millipore公司);电热烘箱(DNP-9022,上海精宏实验设备有限公司);台式恒温振荡器(THZ-D,苏州市培英实验设备有限公司);58℃~60℃切片石蜡(上海华灵康复机械厂);密封式恒温可调电加热器(浙江省嘉兴市凤桥电热器厂);高压锅(苏泊尔);显微镜载玻片(上海好迪实业有限公司);微量离心管(eppendorf,EP);制冰机(AF100,SCOTSMAN)

1。4溶液配制

1。4。1生理盐水(NS)

称取氯化钠       9 g

加去离子水定容至1000 ml,4 ℃保存

1。4。2 LPS溶液(2。5 mg/kg)

取LPS          0。05 g

加NS定容至      40 ml,4 ℃保存

1。4。3 10%水合氯醛

称取水合氯醛      40 g

加去离子水定容至  400 ml,4 ℃避光保存

1。4。4 0。01 M PBS溶液 

取NaCl          8 g

    KCl           0。2 g

    KH2PO4       0。27 g

    Na2HPO4      1。42 g

加去离子水定容至1000 ml,浓HCl调pH7。4,4 ℃保存

1。4。5 枸橼酸缓冲液(0。01 M)文献综述

取枸橼酸缓冲液       1包

加去离子水定容至   2000 ml,4℃保存

1。4。6 TBST缓冲液(10×)

取Tris-HCl(PH7。6)      30。28 g

     NaCl               80。15 g

     Tween-20           10 ml

加双蒸水定容至1000 ml,临用时再用去离子水稀释10倍,4℃保存

1。4。7 5%BSA封闭液

取BSA               0。25 g

加稀释后的TBST缓冲液(10×)定容至5 ml,4 ℃可保存数天

免疫组化技术在PD脑内炎症研究中的应用(3):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_195222.html
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