致谢 15

引言

内生菌(Endophyte)这一词最早是由De Bary（1866）提出的，泛指在生长在植物体内的微生物。按照这个定义，菌根菌和所有的植物致病菌也被包含在了内生菌的范畴之中。目前，关于内生菌的定义和用法出现了分歧，不同的生物学家例如植物学家、真菌学家等，他们就对内生菌有不同的定义。因而，目前能被绝大多数人所接受的是Petrini（1991）提出的概念：指那些在其整个或部分生活史中寄居在健康植物各种组织和器官内部，且不会对植物组织引起明显病害症状的真菌，同时还包括那些在植物生活史中的某一阶段营表面生的腐生菌，对宿主暂时没有伤害的潜伏性病原菌和菌根菌[1]。虽然附生微生物在植物体表面也大量存在，但内生菌更吸引人们的注意，从现有的研究中看，从内生菌中分离的活性代谢物众多且多数作用仍未知。

近几年不少研究已对各种陆生及水生植物中的内生真菌进行分离鉴定，证明了植物体中存在内生真菌是普遍的[2]，且二者能形成互利互惠的微生态环境，有些内生真菌不但能促进植物生长，增强宿主抗旱、抗盐和抗病虫害的能力[3]，还能产生与宿主植物相同或相似的生物活性物质[4]，例如，吴静萍等[5]从密花石解内生真菌镰孢菌属Fusarium sp。菌丝抽提物中分离得到赤霉素，它能明显提高植株生物量、含氮量以及含磷量；袁继鑫[6]将从野生蓝莓菌根分离出的部分真菌接种到园蓝扦插苗中发现可以提高对氮磷钾元素的吸收量。这些种种都使得人们对内生真菌有了越来越浓厚的研究兴趣。

三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels & Gilg ex Diels)又被称为三叶扁藤、金线吊葫芦、蛇附子、石老鼠等等，归属葡萄科崖爬藤属，为多年生植物，茎长度能达3-6m。茎较细弱，具纵棱。叶和卷须为对生，有分枝。叶互生，叶柄2-3cm长，呈掌状、复叶，小叶有3，小叶片狭椭圆，长3-7cm，宽1。5-3cm，中央小叶较两侧者略大，顶端短渐尖至渐尖，基部渐狭，两侧小叶基偏斜，叶缘具刺状疏齿，两面均无毛，或仅在下面中脉上被毛。其块根呈纺锤状、椭圆形，单个或数个相连呈串珠状。其药用价值主要在于块状根，具有清热解毒、消炎等功能，用于治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎。外用治毒蛇咬伤，扁桃体炎，蜂窝织炎，跌打损伤。近年来三叶青还被人们发现具有抗肿瘤的功效。1998年杨大坚[7]等人发表文章称：三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分的主要成分6’-O-苯甲酰基胡萝卜苷具有一定的抑制肿瘤生长的作用。丁钢强[8]等于2005年研究发现，正常细胞较肿瘤细胞受三叶青的各组织提取物的影响要小，证实了三叶青提取物中的乙酸乙酯溶部分的确具显著抑制肿瘤的作用。三叶青提取物对小鼠细胞免疫功的影响也有较明显的提高作用[9]；此外，单核巨噬细胞吞噬的功能也在三叶青提取物的影响下略有增强。因此，科学家们推测三叶青抗肿瘤细胞的作用机制之一是通过机体免疫功能的调节来实现的。这一系列的研究曾引起了社会的广泛关注，在民间三叶青也被人美称为“药王”、“抗癌神草”。三叶青的生长环境通常为山坡下的灌丛中或者是山谷、溪边林下岩石缝里，生长海拔约在300-1300米，生长温度约为18℃，生长速度非常缓慢，其主要分布地区为浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西、云贵高原和台湾等。在此之前，三叶青一直以野生资源入药，其入药部位的特殊以及现阶段用量的扩大，导致目前三叶青的市场需求越来越紧张，然而，在自然条件下三叶青生长缓慢，形成球形块根的时间需要3-5年[10]。论文网 三叶青内生真菌的分离及其分析(2):http://www.youerw.com/shuxue/lunwen_87815.html