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转基因油菜花黄酮提取物对自由基清除能力的测定(3)

时间:2022-02-02 20:49来源:毕业论文
本论文以转基因抗除草剂油菜花为研究材料,对其粗黄铜提取物的抗氧化活性进行研究,综合评价油菜花粗黄铜提取物的抗氧化活性,并比较不同品间抗氧

本论文以转基因抗除草剂油菜花为研究材料,对其粗黄铜提取物的抗氧化活性进行研究,综合评价油菜花粗黄铜提取物的抗氧化活性,并比较不同品间抗氧化活性的差异。相关研究工作即明确了油菜花黄酮提取物的抗氧化能力,也为转基因抗除草剂油菜的食品安全评价提供了理论参考。文献综述

2。 实验材料与方法

2。1 实验材料

材料:采集油菜品种“Q3”、“Z7B10”、“中双7号”和“中双10号”盛花期鲜花。

试剂:树脂AB-8,山东东鸿化工有限公司;芦丁标准品,Sigma公司;2,2-联苯基-1-苦基肼基(自由基),美国公司Alfa Aesar公司;七水合硫酸亚铁,阿拉丁试剂公司;1,10-菲罗啉,一水,三羟基甲基氨基甲烷,抗坏血酸,盐酸,无水乙醇,甲醇,磷酸氢二钠,磷酸二氢钠,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠分析纯,国药集团化学试剂有限公司;超纯水。

2。2仪器与设备

IS9001电子天平,Sartotius公司;Infinite M200 PRO酶标仪,瑞士Tecan公司; FW100高速万能粉碎机,天津市秦思特仪器有限公司;RE2000旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵,郑州长城科工贸有限公司;DHG-9140A电热恒温水浴锅,上海精宏实验设备有限公司;DK-S28电热恒温鼓风干燥器,上海精宏实验设备有限公司;Direct-Q3 超纯水系统,美国millipore公司。

2。3 实验方法

2。3。1 供试品制备

将新鲜油菜花置于60℃鼓风干燥箱中干燥至恒重,粉碎过60目筛。准确称取油菜花粉末一定量,按料液比1:16加入73%乙醇溶液,于73℃加热回流60min,抽滤,得到油菜花黄酮提取液。称取0。50g油菜花粗黄酮提取物,50mL乙醇定容,制成供试品液待测。

2。3。2 超氧阴离子自由基(O2¯▪)的清除能力测定

取于25℃水浴中预热20min的0。05mol/L pH8。2的Tris-HCl缓冲液4。5mL,依次加入蒸馏水1mL,25mmol/L邻苯三酚溶液0。4mL,混匀,再次置于25℃水浴锅准确反映5min,加入8mol/L HCl 1。0mL,终止反应,于325nm波长处可测的吸光值。以1mL样品液代替蒸馏水,按照上述方法测定吸光值。每个处理均做3次重复。O2¯▪清除率计算公式如下:

O2¯▪清除率(%)=                     

A1,Tris-HCl缓冲液4。5mL加入蒸馏水1mL加邻苯三酚溶液0。4mL;A2,以10mmol/L HCl替代A1中邻苯三酚溶液;A3,以供试液替代A1中蒸馏水;A4,以10mmol/L HCl替代A3中邻苯三酚溶液。

2。3。3 羟基自由基(▪OH)的清除能力测定来~自,优^尔-论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

实验按下表1分组,试剂按从左至右的顺序依次添加入至25mL试管内,并震荡均匀。

反应在37℃水浴锅中准确反应1h,快速在536nm处测定吸值,以乙醇溶液为空白对照。每个处理均做3次重复。按以下公式计算出样品对▪OH的清除率:

▪OH清除率(%)=                       

式中:A0为羟自由基体系不加样品液和H2O2的吸光值,A1为羟自由基体系加H2O2,但不加样品液时的吸光值,A2为加入样品液和H2O2的羟自由基体系的吸光值。

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