目前主要采取嫁接，生物防治，化学农药以及轮作的方式进行防治。其中，生物防治由于其自身无毒无害，环境友好等特点开始受到越来越多的重视，其种类也越来越多。而生物防治效果是否稳定的关键就在于所施用的微生物菌剂对于原有土著种群的影响，能否建立起有利于寄主植物健康的根围微生态。

植物的根围微生态号被称植物的“第二基因组”，越来越多的研究证明植物根围微生态与植物本身的健康密不可分[4]。在植物病害生物防治的研究中，更多的人开始关注生防菌株使用后的微生态效应，试图通过根围微生态的重置来防治植物病害特别是土传病害的发生。由于土壤是一个有机整体，在土壤中存在着大量的微生物，特别是在植物根围这个小生境内。

变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)在微生物生态学领域有着广泛的应用[5] 。变性梯度凝胶电泳(DGGE)与传统的平板培养方法相比，该技术无需依赖于微生物的分离培养,就能快速、准确地从复杂样品中获取微生物的菌群组成及其遗传信息[6]，还能够更精确地反映出土壤微生物的多样性,因此此技术被广泛应用于微生物生态学、食品微生物学等领域。该技术的原理是：核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度（Tm），Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下：温度50~60 ℃，变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时，此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值，此区便开始熔解，而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变，达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列，即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。因此，DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。 为了提高DGGE的突变检出率，可以人为地加入一个高熔点区——GC夹，使相应的感兴趣的序列处于低熔点区而便于分析。

本研究旨在通过DGGE方法检测使用微生物菌剂后不同时间点辣椒根围微生态变化情况，探索微生物菌剂重置根围微生态的有效性，为辣椒的可持续种植提供依据。

2。材料与方法

2。1实验设计

本研究以设施栽培辣椒作为研究对象，在辣椒移栽时利用本实验室现有微生物菌剂“宁盾”进行灌根处理，并在移栽后1、2、3个月时分别采集辣椒根围土壤进行检测。以未使用微生物菌剂的辣椒作为对照组，处理组和对照组实验小区随机分布，每个处理3次重复，每个重复小区面积3*2m2。处理组包含4个辣椒品种，分别为红优4号（TH），马六（TM），好农50（TA）和苏椒5号（TS），对照组为红优4号（CH）。文献综述

2。2土壤采集方式

整个土壤采集过程采用三点取样法，每个小区等距离选取辣椒植株三株，首先将辣椒植株拔出，轻轻抖动以去除粘附的大量土壤，再利用毛刷轻轻刷下紧贴在辣椒根部的根围土，三株辣椒样品混合在一起，装入塑封袋放在冰盒中带回实验室，样品前期处理后研磨过2mm筛。进行土壤总DNA 的提取、进行PCR-DGGE分析。plsql的oracle解析json字符串函数

2。3微生物多样性检测方法

2。3。1土壤DNA提取

本实验是利用FastDNA SPIN Kit for Soil（MPbio，USA）试剂盒进行土壤总DNA的提取用于变性梯度凝胶电泳分析（DGGE）。具体提取方法参照试剂盒实验说明。

2。3。2细菌16S rDNA片段的PCR扩增

以样品基因组DNA为模板，采用细菌通用引物GC-338F和518R扩增样品16S rDNA高变区序列。 DGGE施用微生物菌剂对辣椒根围土壤微生态的影响(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_84487.html