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构巢曲霉的2个sHSP的进化分析(4)

时间:2021-08-23 19:52来源:毕业论文
处理条件三:将发育时间设置4个组即6h,12h,24h,48h,每个组内做三个重复实验。 处理条件四:将PDB培养基的氧分压设置4个组即H202-15,H2O2-30,H202-45,H202-6

处理条件三:将发育时间设置4个组即6h,12h,24h,48h,每个组内做三个重复实验。

处理条件四:将PDB培养基的氧分压设置4个组即H202-15,H2O2-30,H202-45,H202-60,每个组内做三个重复实验。

处理条件五:将转接的菌体处理温度设置4个组即4℃,37℃,42℃,48℃,每个组内做三个重复实验。

    其中除了以条件三、五处理的菌体外,其他条件处理的菌体都放在转速为150rpm的摇床上,于25℃温度下振荡培养两天。在这之后,将菌体培养基过滤,得到过滤后的菌丝,并将水挤干,之后用吸水纸隔着纱布把水分充分吸收掉,然后再用锡箔纸包好并做好标记,放入液氮中备用。

1.2.4 RNA提取前的准备

将需要用到的实验器具灭菌消毒:将镊子、研钵、研磨棒、玻璃器皿、铁勺等耐高温的器皿以200℃高温灭菌一小时;枪头和离心管等耗材用浓度为0.1%的DEPC水在37℃下浸泡处理一整夜,之后放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟,或者也可将这些耗材进行两次高压灭菌。

制备DEPC处理水:把DEPC原液倒入去离子水中,混合均匀,将浓度调至0.1%,静置于37℃环境中一整夜,之后放入高压灭菌锅以121℃灭菌二十分钟清除残余的DEPC。

未开封过的试剂,如无水乙醇,氯仿、异丙醇等。来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com

70%的乙醇的配置:利用DEPC水将无水乙醇稀释至浓度为70% 。

1.2.5 RNA提取

用浓度为75%的酒精擦拭超净台和移液枪等;将菌丝加入到已经用液氮预冷的研钵中,使用液氮预冷后的研磨棒将其研磨成粉末状,同时,此过程必须保持在冷冻状态,不得让样品融化;用液氮预冷过的铁勺将研钵中的粉末转移到同样用液氮预冷过的2ml离心管;在这之后,向离心管中加入1mlTrizol,轻轻将其混匀,放于室温下静置10分钟;之后,在4℃下,将该离心管置于离心机中以转速12000rpm离心5分钟;将上清液吸取出来置于新的2ml离心管中,再加入400μl的3M醋酸钾;之后加入200μl的氯仿,将离心管内的液体轻轻混匀,放于室温下15分钟;在4℃下,将该离心管置于离心机中以12000rpm离心5分钟;再次将上清液吸取出来置于新的2ml离心管中,之后加入等体积的异丙醇,将离心管内液体轻轻混匀,于-20℃下静置30分钟;在4℃下,将该离心管置于离心机中以转速12000rpm离心10分钟;之后,重复上一步骤;离心后的离心管弃去上清液,保留沉淀物,在去上清时,用移液枪小心吸取残余的液体,之后,将保留沉淀物的离心管放在超近工作台中进行风干,风干时间为5分钟;上述步骤完成后,在向离心管中加入40μl的DEPC处理过的去离子水,将沉淀物即RNA溶解;最后进行电泳,检测RNA的质量以及其浓度。 

构巢曲霉的2个sHSP的进化分析(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_80733.html
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