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葡聚糖酶重组马克斯克鲁维酵母利用纤维素发酵生产乙醇条件的最佳方案(3)

时间:2021-08-09 22:15来源:毕业论文
-1,4-内切葡聚糖酶可特异性作用于-1,4-葡萄糖苷键,使其内部的-l,4-糖苷键水解,生成纤维二糖与纤维寡糖等短链低聚糖;-l,4-糖苷键把这些短链低聚糖继续

β-1,4-内切葡聚糖酶可特异性作用于β-1,4-葡萄糖苷键,使其内部的β-l,4-糖苷键水解,生成纤维二糖与纤维寡糖等短链低聚糖;β-l,4-糖苷键把这些短链低聚糖继续降解为两个葡萄糖分子[13]。

秸秆多种多样,包括稻草、麦秸、玉米秸、大豆秸等,其主要成分是木质素、纤维素、半纤维素等聚合而成的致密碳水化合物以及少量蛋白质、脂肪、木质素、醇类、醛、酮和有机酸[14]。不同秸秆其组成成分和比例也不同,其主要成分是纤维素,其次是半纤维素和木质素,不同植物体残体中这3种物质的比例是不同的。

1.2.2  纤维素酶的性质

细菌产生的纤维素酶量少,主要是内切酶,大多数对结晶纤维素没有活性,而且不能分泌到细菌细胞外,常常聚集形成多酶复合体。真菌能产生大量的纤维素酶,产生的酶组分全能分泌到菌体外,一般不聚集成多酶复合体,但可以相互发生强烈的协同作用[14]。

2  材料与方法

2.1  材料

2.1.1  菌株

所用菌种为实验室保藏的内切葡聚糖酶重组马克斯克鲁维酵母

2.1.2 主要仪器及设备

2S-75HJ型高压灭菌锅:江阴滨江医疗设备有限公司

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台:苏州净化设备有限公司

SPX-250B生化培养箱:上海佳胜实验设备有限公司

HD-930型组合式全温摇床:太仓市博莱特实验仪器厂,

电子天平BS210S:北京赛多利斯天平有限公司

高速冷冻离心机HR21M:湖南赫西仪器设备有限公司

HD-930DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱:上海精宏实验设备有限公司

EPED-E2-10TF纯水仪:南京易普易达科技有限公司

雷磁pHS数显pH计:上海精密科学仪器有限公司

HH-S恒温水浴锅:金坛市亿通电子有限公司

722S型可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司

2.2  主要试剂以及培养基的配制

2.2.1主要试剂

1.0.1M 磷酸缓冲液(PBS)(PH=6.0):1L蒸馏水中加入13.682g 二水磷酸二氢纳和4.405g十二水磷酸氢二钠充分溶解。

2.乙酰胺:将装有乙酰胺的瓶子在121℃下高温灭菌20min,在100mL的0.1M磷酸缓冲液(pH=6.0)中加入1.475g乙酰胺,在超净工作台上点燃酒精灯,用针管吸取配好的溶液装上200微升的过滤芯,将溶液过滤到灭菌后的瓶子中,冻存备用。来`自^优尔论*文-网www.youerw.com

3.DNS:蒸馏水1416mL、氢氧化钠19.8g、3,5-二硝基水杨酸10.6g混合,溶解后加入酒石酸钾钠306g、苯酚(50℃溶化)7.6mL、偏重亚硫酸钠8.3g,用5-6mL,0.1M的HCl对3mL配好的溶液进行滴定,用苯酚作指示剂,溶液从红色变成原有的颜色。如果有必要时还需要加入氢氧化钠,配好的DNS分装后需避光。

4.柠檬酸缓冲液(50mM,pH4.0):A溶液:1.0505g柠檬酸溶于50mLddH2O。B溶液:1.4705g柠檬酸钠溶于50mLddH2O。从A溶液中取32.75mL,B溶液中取17.25mL,两者混匀,再加入50mLddH2O。

5.2% CMC( w/v)(羧甲基纤维素纳)溶液:称量2g CMC-Na(800mPa-s~1200mPa-s),加入约80mL柠檬酸缓冲溶液(50mM,pH4.0),50℃边水浴边搅拌溶解,完全溶解后定容至100mL,储存于冰箱中备用。

葡聚糖酶重组马克斯克鲁维酵母利用纤维素发酵生产乙醇条件的最佳方案(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_79934.html
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