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细胞周期调控因子RBR基因的转基因植物构建(4)

时间:2020-04-12 14:54来源:毕业论文
1) 使用德国 Qiagen公司的植物RNA提取试剂盒提取植物总RNA。 2) 具体实验步骤如下: 3) 本氏烟叶片样品选取Buffer RLT裂解液。1 ml Buffer RLT裂解液中加入10 l -巯

1) 使用德国 Qiagen公司的植物RNA提取试剂盒提取植物总RNA。

2) 具体实验步骤如下:

3) 本氏烟叶片样品选取Buffer RLT裂解液。1 ml Buffer RLT裂解液中加入10 µl β-巯基乙醇(β-ME)。

4) 称取不超过100 mg的样品加入液氮中,用研钵和钵杵研磨。 加入450 µl Buffer RLT剧烈涡旋震荡。

5) 将裂解液转到Qiashredder spin柱(淡紫色),4℃14000 rpm离心2 min。

6) 将清澈的上清液中加入0.5倍体积96-100%的乙醇,立即用枪吸打混合均匀,将上步液相(约650 µl,可能有沉淀物形成)转移到RNeasy Mini spin柱(粉色),轻轻合上盖子。4℃≥10000 rpm离心30 s,丢弃滤液。向RNeasy Mini spin柱中加入700 µl Buffer RW1,轻轻合上盖子,4℃≥10000 rpm离心30 s,丢弃滤液。

7) 向RNeasy Mini spin柱中加入500 µl Buffer RPE,轻轻合上盖子,4℃≥10000 rpm离心30 s,丢弃滤液。

8) 向RNeasy Mini spin柱中加入500µl Buffer RPE,轻轻合上盖子,4℃≥10000 rpm离心2 min,丢弃滤液。

9) 将RNeasy Mini spin柱置于一个新的离心管中,悬空加入40 µl RNase-free水至RNeasy Mini spin柱膜上,合上盖子。4℃≥10000 rpm离心1 min,洗脱RNA。

10) 取1.5 µl用Nanodrop 2000测定浓度;取1 µl跑1.2% Agarose胶(150 V  20 min)。做好标记,-80℃贮存。

细胞周期调控因子RBR基因的转基因植物构建(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_49847.html
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