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水稻F30基因定位及克隆分析(3)

时间:2020-01-12 10:53来源:毕业论文
1 营养液Ⅴ 5 营养液Ⅵ 5 1.2.2 DNA的提取 提取水稻F30定位群体各单株DNA,做好标记备用。DNA提取方法如下: 1) 用剪刀剪取水稻一段叶片约0.1-0.2g放在离心管

1

营养液Ⅴ 5

营养液Ⅵ 5

1.2.2  DNA的提取

提取水稻F30定位群体各单株DNA,做好标记备用。DNA提取方法如下:

1) 用剪刀剪取水稻一段叶片约0.1-0.2g放在离心管内,加钢珠,加液氮冷却,用研磨仪研磨成粉末。

2) 加入400µlDNA提取液,混匀,75℃水浴10min,上下颠倒使其混和均匀再水浴10min。

3) 从水浴锅中取出离心管, 12000rpm离心10 min。

4) 吸取上清液(约300µl)到新的离心管中,弃沉淀。

5) 在离心管中加入2/3上清液体积的异丙醇*优尔`文~论|文/网www.youerw.com,混匀,并在4℃冰箱中放置5分钟。

6) 12000rpm离心10 min,倒出上清液,然后加入75%乙醇750µl进行洗涤,8500rpm离心5min,倒掉酒精,自然风干。

7) 向管中加入200µl的ddH2O溶液,冰箱保存。

提取试剂盒提取水稻DNA步骤: 

1)剪取水稻叶片0.1-0.2g放在离心管内,加钢珠,加液氮,用研磨仪研磨成粉末。

2)800µl Lysis Buffer,加入β-巯基乙醇至终浓度0.1%,65℃下混匀。

3)加入研磨好的粉末中,65℃水浴20min,其间颠倒混匀。

4)加入500μl氯仿,混匀。

5)12000rpm室温离心5min。

6)取上层清液,加入700μl Bind Buffer,混匀,转入离心柱中。

7)12000rpm离心1min,弃废液。

8)加入700μl Wash Buffer A(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,。

9)弃废液,加入700μl Wash Buffer B(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min。

10)弃废液,加入500μl Wash Buffer B,12000rpm离心1min,弃废液。

11)12000rpm离心2min,离心柱置于新的离心管中,打开盖,放置5-10min,至无乙醇。

12)加入70μl TE Buffer(65℃预热),置室温2-5min,12000rpm离心2min。

水稻F30基因定位及克隆分析(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_44954.html
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