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甘蓝型油菜杂种与亲本在盐胁迫下生理性优势的比较(4)

时间:2018-07-20 16:19来源:毕业论文
1.2.7 Greiss试剂法测定植物叶片组织中的一氧化氮含量[12] 取植物叶片组织待测样品0.2 g,加入1 mL 去离子水研磨匀浆,转移至7 mL 离心管中,加入1 mL 50%


1.2.7  Greiss试剂法测定植物叶片组织中的一氧化氮含量[12]
取植物叶片组织待测样品0.2 g,加入1 mL 去离子水研磨匀浆,转移至7 mL 离心管中,加入1 mL 50% 醋酸钠溶液(50 g NaAc 加去离子水定容至100 mL)和1 mL 0.1% 磺胺(对氨基苯磺酸)溶液(0.1 g 磺胺溶于100 mL 去离子水中,由于磺胺难溶于水,因此溶解时需煮沸加热溶解)后摇匀。用1 M 的HCl 调节pH 至6.25-6.35,并加入0.03-0.05 g 锌粉后,振荡10 min。将处理液分装至3个2 mL 小管中,往每个小管中加入500 μL 正丁醇(用于脱色),振荡5 min。将处理液置于高速离心机中,1200 rmp 下离心15 min 后,取中间层1/2-2/3 体积,将三个小管中提取到的中间层合在一个管中,再次12000 rpm 下离心15 min,取中间层1.5 mL 及以上。取0.5 mL 提取液,加入1 mL 萘胺显色,用磷酸调节pH 至1.75-1.85,37℃ 下静置反应20 min 后,测量540 nm 处的吸光度,记为A样。并取0.5 mL 提取液,加入1 mL H2O 用磷酸调节pH 至1.75-1.85,37℃ 下,静置反应20 min 后,测量540 nm 处的吸光度,作为样品对照空白标准吸光度,记为A样对空,NO含量=[(A样-A试空-A样对照)/(A标-A试空)]×60 (单位:μmol/L;A标:标准液按照1 mL 2mM KNO3+1 mL 50% NaAc +1 mL 0.1% 磺胺配制之后与样品提取液一起进行“调节pH 至6.25-6.35”以及后续所有处理后,测量540 nm 处吸光度;A试空:按照1 mL H2O+1 mL 50% NaAc +1 mL 0.1% 磺胺配制之后与样品提取液一起进行“调节pH 至6.25-6.35”以及后续所有处理后,测量540 nm 处吸光度)。
1.2.8  数据分析处理
    所有的实验数据均使用来自至少三次平行实验所得的平均值±标注误差来表示,数据的统计分析使用SPSS软件16.0版进行,数据的差异性分析采用Duncan多重测验的方法进行,差异显著性设置在P<0.05的水平。 甘蓝型油菜杂种与亲本在盐胁迫下生理性优势的比较(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_19915.html
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