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响应面法优化富硒平菇发酵工艺条件(2)

时间:2017-06-28 22:49来源:毕业论文
1.材料与方法 1.1试验材料 1.1.1试验菌种 菌种:平菇107,周口市农科院提供的菌种。 1.1.2试验试剂 蔗糖,亚硒酸钠,浓硝酸,乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)


1.材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验菌种
菌种:平菇107,周口市农科院提供的菌种。
1.1.2试验试剂
蔗糖,亚硒酸钠,浓硝酸,乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na),甲酸,甲苯,3,3'-二氨基联苯胺(DAB),浓氨水,95%乙醇,以上试剂均为分析纯。
1.1.3主要仪器
表1 主要仪器一览表
Table1  main instruments list
仪器名称    生产厂家
LDZX-40KBS立式电热压力蒸汽灭菌器    上海申安医疗器械厂
SW-CJ-2FD洁净工作台    上海博迅实业有限公司医疗设备厂
DGF30电热鼓风干燥箱    南京试验仪器厂
荣声BCDR23冰箱    广东省顺德市荣贵区荣贵路
HH-S型水浴锅    巩义市英峪予华仪器厂
JJ-2组织捣碎机    金坛市杰瑞尔电器有限公司
UV-5100紫外分光光度计    上海元析仪器有限公司
HWS24电热恒温水浴锅    上海一恒科技有限公司
AL204电子天平    梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
1.1.4培养基
平菇发酵培养基基本成分:棉籽壳80%,麦麸19%,蔗糖1%,pH自然,121 ℃下,2 h[10]。
1.2试验方法
1.2.1硒标准曲线的绘制[11-13]
试验机理:硒元素与3,3'-二氨基联苯胺可以在酸性条件下作用,生成的络合物呈现黄色(Se-DAB)。在pH为7.0~7.5条件下,用甲苯进行萃取,观察有机层显色的程度,在420 nm处利用分光光度计即可测定溶液的OD值。
试验试剂的配制:称取一定质量的亚硒酸钠,加入硝酸溶液(浓硝酸:水=1:30)制成每毫升含硒1.00 mg的溶液,此溶液即为标准硒贮备液;吸取1 mL标准硒贮备液,用硝酸溶液(浓硝酸:水=1:30)定容至100 mL,即为10 μg•mL-1标准硒标准液;0.25 gDAB溶解到50 mL95%的乙醇中,65摄氏度下加热溶解得到0.5%DAB溶液。
硒标准曲线的绘制:分别取2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL硒标准液于100 mL烧杯中,然后加水至40 mL。用氨水和甲酸调节pH,使各个烧杯的pH为2~3,加入4 mL 5%的EDTA-2NA溶液,用来掩盖干扰离子。接着加入2 mL 0.5%的DAB溶液,摇匀后置于65 ℃恒温水浴锅中避光反应30 min。取出后用浓氨水调节pH为7.0~7.5,转入分液漏斗中,加入10 mL甲苯萃取,剧烈震荡2 min,静置3~4 min分层,弃水层,将甲苯层通过脱脂棉过滤到试管中待用。最后用分光光度计测420 nm处的OD值,采用甲苯做空白对照。
1.2.2单因素试验
1.2.2.1硒元素单因素试验
将固体培养基按照棉籽壳250 g、麦麸60 g、蔗糖3.2 g的配方进行混匀,配制9份。将系列浓度的Na2SeO3溶液与固体栽培料混匀,制成含硒量分别为0、80、160、240、320、400、480、560、640 mg/kg(以Se计)的培养基。混匀后分别装袋,封口,保证其不漏空气,并分别贴上标签0、1、2、3、4、5、6、7、8。将培养料在高温灭菌锅中以121摄氏度的温度灭菌2个小时。将灭菌的培养基放在超净工作台上,晾12个小时左右,直到其温度降至室温,然后在超净试验台上用镊子进行接种,注意接种量要保持一致。封紧袋子,将其放在阴凉、潮湿的地方,遮光培养。培养至所有的袋子都爬满白色菌丝,将袋口剪开,均匀的洒上水,让其仍然在阴凉的地方生长。每天要在早、中、晚三次洒水,水量不要太多,洒水要均匀。注意观察菌丝的生长情况,每5天测量一次菌丝的长度[14-17]。
平菇生长成熟后,及时采摘,并在每一份平菇中称取20 g,然后加水180 mL进行打浆,用量筒测量浆液体积,分别写上序号。从每份浆液取40 mL倒入100 mL,加入适量的硝酸溶液,调节pH至2-3。后面的操作步骤与绘制硒标准曲线步骤一样。得到每组平菇的硒元素含量的OD值。 响应面法优化富硒平菇发酵工艺条件(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_10082.html
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