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ARMS-PCR 快速检测 p53 基因外显子突变热点的快速鉴定

更新时间：2011-10-12: 来源：毕业论文

图1-1 ARMS-PCR原理示意图原文请+QQ3249'114优.文^论,文'网
ARMS-PCR 点突变的检出率依赖于反应条件的优化和防止引物与靶 DNA 错配时可能发生的错配延伸，这可通过调整实验条件如：引物、靶 DNA、Taq 酶的浓度和反应温度等来提高特异性，在反应体系中加入甲酰胺亦可减少非特异性扩增。还可通过人为地使引物3′ 末端的第二个碱基发生错配来阻止错误延伸[17]。
针对 p53 基因外显子上高突变率的位点设计双错配碱基的 ARMS-PCR 特异性引物，对已经临床确定的患者样品与正常人样本对照，用特异性引物进行 PCR 扩增鉴定，然后将扩增的产物进行 DNA 序列分析。建立快速、简便、准确、经济的ARMS-PCR基因诊断方法在临床诊断无疑很具有较高的实用价值。
1.4研究趋势及其展望
癌症的基因治疗是未来必然的发展趋势，p53 基因作为一种重要的抑癌基因定会得到充分的研究与发展，与其相关的各种因子的作用机制及调控意义也将得到深入研究，从而为应用于肿瘤治疗的相关高效药物制剂的开发奠定基础，给人类健康带来福音。
ARMS-PCR 作为一种基因诊断方法，因其快速、简便、特异、经济的特点，必将具有极为广阔的临床应用前景。毕业论文http://www.youerw.com/
2　　材料与方法
2.1实验材料
2.1.1实验样品
正常人DNA样品来源：深圳华因康基因科技有限公司10位健康同事血液基因组；
临床DNA样品来源：北大医院深圳分院10个肺癌患者病理分析材料。

2.1.2菌种和质粒
本实验使用的感受态细胞为深圳华因康基因科技有限公司提供的大肠杆菌DH5α菌株；
实验使用的pMD 19-T载体购于TaKaRa公司。

图2-1 pMD 19-T载体示意图

2.1.3实验试剂
表2-1 主要试剂及其生产厂家
药品、试剂盒厂家药品、试剂盒厂家
琼脂糖胶回收试剂盒华因康血基因组小量制备试剂盒 Axygen
20 bp DNA Ladder Marker Takara 石蜡包埋样品DNA提取试剂盒 Omega
100 bp DNA Ladder Marker Takara Sanprep柱式质粒小量抽提试剂盒生工生物
1 kb DNA Ladder Marker 北京鼎国 2× PCR Taq Master Mix Omega
甲叉双丙烯酰胺北京鼎国 10× PCR Reaction Buffer 上海英骏
EDTA•2Na•2H2O 北京鼎国 Platinum Taq Polymerase 上海英骏
琼脂粉北京鼎国 DMSO FINNZYMES
琼脂糖 BioWest 5× GC Reaction Buffer FINNZYMES
二甲苯天津凯通 Phusion DNA Polymerase FINNZYMES
续表
药品、试剂盒厂家药品、试剂盒厂家
氯化钠天津凯通 10mM dNTP Mix Gen Script
氢氧化钠天津凯通 Taq DNA Polymerase Gen Script
过硫酸铵原文请+QQ3249'114优.文^论,文'网
丙烯酰胺生工生物
生工生物 Dnp I
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