(A)溶液的配置
配置43%(g/ml)(NH4)2 SO4溶液:将430.0g(NH4)2 SO4固体加水定容至1000ml。
(B)相图的制作
精确称取PEG400 0.7g左右于大试管中,加入0.5ml去离子水,用移液管滴加已配好的硫酸铵溶液,并不断在旋涡混合器上混合,观察溶液的澄清程度,直至事关内溶液开始浑浊位置,记录硫酸铵溶液的加量(ml)根据密度值求出质量(g),然后继续加入水,使溶液澄清(加水量根据点子的密集程度控制),继续加硫酸铵溶液不算混匀,直至浑浊,反复操作,计算每次打到浑浊时PEG和(NH4)2 SO4在系统中的质量分数(g/g)。以PEG质量分数为纵坐标,(NH4)2 SO4质量分数为横坐标作图。
其他分子量的PEG配成50%的溶液按照步骤(B)重复操作。
2.4.2 黑木耳的预处理
黑木耳颗粒的粒度越小,单位体积颗粒表面积越大,则相同条件下黑木耳粗多糖溶出率也越大。但若选用的黑木耳粒度过小,则在筛选或实验过程中损失较大,所以,黑木耳经过除杂质,粉碎后选用适中的筛子将黑木耳粉进行筛选,本课题选用60目筛子,通过筛选得到粒度适中的黑木耳干粉。
称取经筛分后的黑木耳粉末5.0克,加入100ml水,在70℃下恒温3.5小时,之后倒于刻度离心管中高速离心,离心机转速3600转/分本文来自优,文,论#文,网,
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2.4.3 PEG分子量对于黑木耳多糖提取率的影响
形成两水相的PEG分子量影响了系统的粘度和多糖的分配系数,是影响多糖萃取率的重要因素.因此,首先要确定形成两水相的PEG分子量.根据相图,采用PEG400,600,1000,2000,4000,进行实验,准确称取各个分子量的PEG 2.6g,硫酸铵1.5g放入刻度离心管中再加入5ml蒸馏水,然后取0.5ml黑木耳预处理液加入刻度离心管中50℃水浴30分钟,最后放入高速离心机中离心5min(3000转/分)。
分相后按照2.2.4步骤分别测定上下相的多糖浓度。然后按照公式(2.3)计算多糖萃取率。
表2.4 PEG分子量实验条件表
个人党性分析报告PEG分子量 PEG质量分数(%) 硫酸铵质量分数(%) 黑木耳预处理液(ml) 温度(℃)
400 29 11 0.5 50
600 29 11 0.5 50
1000 29 11 0.5 50
2000 29 11 0.5 50
4000 29 11 0.5 50
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2.4.4 硫酸铵质量百分浓度对黑木耳多糖提取率的影响
根据2.4.3实验结果,用PEG400的两水相萃取木耳多糖时,其萃取率最高.因此,以下实验均以PEG400形成的两水相进行实验。
固定PEG400质量分数20%,改变硫酸铵的质量分数20%、25%、30%、35%、40%,配置两水相体系(参照表2.5),用蒸馏水水将每离心管调至13g,然后50℃水浴30min,最后高速离心5min(3000转/分)。
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