粗毛栓菌漆酶的初步分离与纯化 第4页

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漆酶酶活力计算公式   U/L=n×ΔA×106/23,300×3   (23,300为在420nm处的摩尔消光系数,ΔA代表吸光值,n代表稀释倍数，n=250) 
表1. 洗脱组分漆酶活力测定结果（λ=420；20℃）
试管号 测得的数值abs（三分钟） 试管号 测得的数值abs（三分钟）
30 0.062     U=1995.7 31 0.102    U=3283.3
32 0.121     U=3894.8 33 0.278    U=8948.5
34  0.454     U=14613.7 35  2.487    U=80053.6
36  2.080     U=66952.8 37  1.609    U=51791.8
38  0.971     U=31255.4 39  0.627    U=20182.4
40  0.496     U=15965.7 41  0.373    U=12006.4
42 0.282     U=9077.3 43 0.237    U=7628.8
44 0.184     U=5922.7 45 0.184    U=5922.7
2. 2. 2 以洗脱体积为横坐标，酶活力值做纵坐标。所得洗脱曲线见图1。
图1.粗毛栓菌漆酶的Q-Sepharose柱层析
由图可知具有较大漆酶活性的组分主要集中在139.5mL到202.5mL之间。
2. 3 蛋白质含量标准曲线
2. 3. 1 牛血清蛋白浓度与光密度值的关系,见表2。

表2.牛血清蛋白浓度与光密度值值的关系
BSA浓度（μg/ml） 20 40 60 80    100
光密度值（OD595） 0.265 0.483 0.765 0.932 1.036
2. 3. 2蛋白质含量标准曲线，见图2。
得到标准曲线的回归方程为：A=0.009955x+0.0989，结果表明，牛血清白蛋白量在0-1mg/mL范围内与光密度值线性关系良好。
图2.蛋白质含量标准曲线
2. 4 粗毛栓菌漆酶的柱层析纯化结果，见表3。

表3.粗毛栓菌漆酶的纯化结果
 Summary of the purification of laccase in Trametes gallica Fr.
纯化步骤       总酶活 /U  总蛋白/mg  比酶活（U/mg）  回收率%    纯化倍数
Purification    Total       Total      Specific      Recovery   Purification
  step         activity     protein   activity        rate        fold
粗酶液         17012.088    34.8      488.853          100          1
Crude enzyme
阴离子交换层析 1939.378     0.792     2.45×103         11.4         5.0     
Sepharose-Q fast flow

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致谢
诚挚的感谢我的指导教师孙迅教授，孙教授学识广博，治学严谨，在毕业设计的实验和论文定稿过程中，孙老师给了我细心的指导和教育，谢谢您！
感谢实验室的所有同学，在毕业设计阶段，大家的互相帮助，相互关心，相互学习，使我们有了一个很好的学习氛围和实验环境，得以顺利完成这次毕业论文的实验，谢谢大家！

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