对卵生爬行动物而言,卵的孵化成功率将直接影响食用甲鱼能否快速繁殖以及相关产业的经济效益。因此,怎样提高卵的孵化率成了养殖食用甲鱼的重点关注问题之一[4-6]。已有的研究表明,爬行动物在极端温度下胚胎不能完全发育[7]。低温将会延缓或滞留胚胎发育,但通常对胚胎发育产生的影响较小或没有致死效应,然而极端高温可能导致胚胎畸形和死亡的几率提升[8-9]。在后代可存活的孵化温度范围内,较高的温度可导致胚胎发育较快,因此,也缩短了胚胎发育周期,导致胚胎发育不全。还有一个值得关注的问题是,孵化出的新生食用甲鱼幼体,生长状况如何。孵化温度将影响食用甲鱼的胚胎发育,进而影响幼体的后续生长,较明显的体现则为体型大小、体重、行为以及抗菌免疫能力等[10-12]。关于抗菌免疫能力,较为明显且直观的因素就是血清中的酶活力,如溶菌酶(Lysozyme)、酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)。溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复合盐,使病毒失活。因此,溶菌酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。而酸性磷酸酶是在酸性条件下,催化磷酸单脂水解的酶,是巨噬细胞溶酶体的标志酶,溶酶体的重要组成部分,也是巨噬细胞中最具代表性的酶的种类之一。若机体被病原性微生物入侵,巨噬血细胞会识别病菌并对其进行胞内降解,这其中包括酸性磷酸酶在内的溶酶体就起了关键作用,这种防御机制的特点是病原体激活了以酸性磷酸酶为主体的一系列水解酶的溶体酶,提高了酶活性,因此酸性磷酸酶的活力大小有成为监测食用甲鱼养殖环境和病理变化的潜力。

目前,就孵化温度对幼体孵化生长发育的影响这个问题,在鱼类、鸟类、爬行类中研究较多,但在对爬行类甲鱼幼体免疫能力的影响这方面,研究还是较少的。而现阶段,气候问题和极端气候问题严重,全球温室效应日渐严重。热浪对人体健康尚且有影响,会影响冠心病等心脑血管疾病患者的发病率,造成人体死亡。有预测,热浪可能会影响生物和营养之间的交替作用。热浪,指天气持续地保持过度的炎热,也能伴随有很高的湿度。目前就热浪的定义还不是特别明确,世界气象组织的建议为:日最高气温高于32 °C并且持续三天以上。我国高温的定义为日最高气温大于等于35 °C,连续三天以上则可称为高温热浪。大量研究结果表明,频繁和广泛的热浪会使生物性能水平降低。因此,热浪对生物体特征以及生理生态功能的影响有待探究。本次研究将模拟高温热浪,研究高温热浪对食用甲鱼幼体特征以及免疫能力的影响[13]。论文网

1 材料与方法

1。1 实验材料

食用甲鱼受精的卵于2016年4月购自中国浙江杭州某私人孵化场,减去运输过程中破损的甲鱼卵后合计422只,用于本次试验。甲鱼卵用泡沫专用板收纳,并用微湿润的报纸覆盖四周以保证环境的稳定。将422只食用甲鱼卵用天平称出每个卵的质量并测量每个卵的长宽并记录,同时将以上食用甲鱼卵按窝编排好数字,以便实验统计。

实验所用的致病菌嗜水气单胞菌TL1是从一只来自中国浙江某个甲鱼厂中生病的食用甲鱼的肝脏中分离得到的,提纯并培养后和甘油混合将其保存在-80 °C冰箱中。

1。2 实验方法

1。2。1 卵的孵化

将422只按窝卵编排好数字的食用甲鱼卵平均分配,使同温度处理下用于同一个实验部分的甲鱼卵都要来自同一窝,然后将分配好的食用甲鱼卵白斑部分朝上,放入一定湿度(蛭石:水=1:1)的孵化盒中,分别放置在28 °C、29±9 °C孵化箱内进行孵化。每周两次定期检查是否有发霉的食用甲鱼卵,同时适当的加水以维持孵化盒内的湿度,并适当调节孵化盒在孵化箱中的相对位置,以排除孵化箱的内部温差对食用甲鱼卵孵化可能产生的影响,以保证实验的准确性,减小误差率。同时在孵化过程中注意甲鱼卵是否存在发霉等状况,及时丢弃坏掉的甲鱼卵,以免感染剩余的卵。

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