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里氏木霉中β-葡萄糖苷酶cel3c的克隆(6)

时间:2022-01-06 21:47来源:毕业论文
将挑的菌落置于已有2ml的LB培养基(卡那霉素浓度为100g/ml),200rpm,37℃摇床12-16h。将摇床过后的菌液倒1。5ml置离心管,用碱性裂解法提取质粒。之后进行

将挑的菌落置于已有2ml的LB培养基(卡那霉素浓度为100µg/ml),200rpm,37℃摇床12-16h。将摇床过后的菌液倒1。5ml置离心管,用碱性裂解法提取质粒。之后进行电泳。然后酶切重组子用XbaⅠ、HindIII进行双酶切,将pCAMBIA-1300与Pact-cel3c分开,酶切后进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。

2。2。6  cel3c基因的序列测定

将β-葡萄糖苷酶cel3c寄去赛百盛基因技术有限公司,由其在DNA自动测序仪上进行测序。

3  结果与分析

3。1  cel3c的PCR扩增

在引物为cel3c-Act-F和cel3c-R将目的基因进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳后得出目的基因片段大小接近3000bp左右,如图2。具体基因序列可见3。9,可得知β-葡萄糖苷酶cel3c的大小为2929bp,由此可见PCR鉴定结果正确。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

3。2Pact的PCR扩增

在引物为cel3c-Act-R和XbaI-F将启动子DNA进行PCR扩增,电泳后得出启动子片段大小在1000kb以上,在1200-1300之间,如图3。具体基因序列可见3。9,可得知启动子的片段大小就在1251bp,电泳检测结果表明得到了预期大小的启动子DNA。

里氏木霉中β-葡萄糖苷酶cel3c的克隆(6):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_88094.html
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